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亲和沉淀
汇报人:梅胜
日期:2014-01-06
研究进展
1、早在1910年就有人用不溶性淀粉选择吸附、提
纯淀粉酶,这是最早的基于生物特异性进行分离
纯化的实例。
2、事实上几乎所有的生物活性物质都存在类似于淀
粉酶与淀粉间的亲和作用,如酶与底物、抗原与
抗体、激素与受体、多糖与蛋白复合体等。这种
利用生物大分子特异亲和力而设计的层析技术称
为亲和层析。
3、而亲和沉淀是在亲和层析基础上建立起来。
定义
1.亲和沉淀是利用蛋白质与特定的生物合成分子
(免疫配位体、基质、辅酶等)之间高度专一的
相互作用而设计出来的一种特殊选择性的分离技
术。是蛋白质类生物大分子相互亲和作用与沉淀
分离相结合的的分离纯化技术
2.操作过程
次作用亲和沉淀
次作用亲和沉淀
次作用亲和沉淀
原理是双配基或多配基与含有两个以上亲和结合部位的多价蛋
白质产生亲和交联,增大为较大的交联网络而沉淀。
①初始阶段:将水溶性化合
物分子载体偶联上亲和配
体,亲和配基与目标蛋白
质络合形成沉淀。这与抗
亲和物
分)
原抗体的沉淀作用相似
当配基与蛋白质的亲和结
合部位的效价比为时沉淀1-n
率最高。
②所得的沉淀物用一种适当
的缓冲溶液进行洗涤,除
去杂质
③用一种适当的试剂将目标
蛋白质从配基中解离出来。
亲和吸附介质
1、亲和吸附介质:载体+配基
2、常见载体:纤维素、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶
聚丙烯酰胺凝胶、多孔玻璃珠、壳聚糖等
3、配基与待分离的物质之间的亲和力具有较强的特
异性。
4、配基能够与载体稳定的共价结合,且不易脱落
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