DNA提取方法和步骤.docVIP

DNA提取方法和步骤 取1—2cm2幼叶，装入1.5ml离心官中加液氮。（实际应用时，用1-2 冷冻后，迅速研磨成粉末，在化冻前加入600ul预热到650C的 于650C，20 冷却至室温，加500ml氯仿/异戊醇（24：1）混匀（不可振荡，但可颠倒，混匀至溶液成乳浊状） 40C，10000rpm，离心10 **取上清液，加等体积氯仿/异戊醇（24：1）混匀（用宽口吸头取上清液至新离心管，不可过猛振荡，约混30 min）40C，10000rpm，离心10 取上清液，加等体积氯仿/异戊醇（24：1）混匀（用宽口吸头取上清液至新离心管，不可过猛振荡，约混30 min）40C，10000rpm，离心10 加2倍上清液体积的100%乙醇于新离心管中，缓缓加入上清液，可见DNA出现。 用一事先剪去尖端的灭菌吸头钩出DNA。 用1ml70%乙醇（-200C）洗涤 干燥后加60ulTE（含RNA酶1ul 1mg/ml）溶解DNA，消化（除去）RNA，室温保持30min 加180ulTE,240ul氯仿/异戊醇（24：1）混匀. 40C，13500rpm，离心5 取上清液，加1/10体积,3mol/l乙酸纳(ph=5.5)，2倍体积95%乙醇（-200C）， 钩出DNA75%乙醇洗涤，钩出 用50ulTE溶解。 ▲DNA提取液 500ml 100ml 400ml 1mol/l Tris-Hc