第一章病毒[文字可编辑].ppt

1 、动物病毒的空斑试验 （ 1 ）单层细胞的制备和培养 动物组织切成 0.5-1 mm 3 小块 → 洗涤 → 5% 胰酶 消化 10- 15 min → 收集细胞并计数 → 加入生长液 并分装 → 37 ℃培养 2-3d 即长成单层细胞备用 （ 2 ）病毒样品的采集与制备 固体样品 加液体培养基制成悬液， 10000r/m 离 心 10 min ，取上清液备用 。 液体样品 直接离心分离。 空气样品 用泵抽取至长有宿主细菌的平板上，或 是将长有宿主细菌的平板在空气中暴露 30-60min 。 （ 3 ）动物病毒的接种与观察 空斑 ：是原代细胞或传代单层细胞被病毒感染后，细胞被病毒蚀空形成 的空斑（也称蚀斑）。一个空斑代表一个病毒。通过计数可知单位体积 样品中的病毒数。 通过病毒空斑单位（ plaque formation unit ） ? PFU 的计数得到单位 体积中含有的病毒数 病毒接种 适当孵育 注入软琼脂或 羧甲基纤维素 培养 形成空斑 （ 4 ）具体培养方法： Hanks 液洗涤培养 24-48h 的单层细胞 接种病毒样品，在在37℃恒温箱中吸附 1h 加琼脂培养基覆盖，置于37 ℃恒温箱培养 24h 后 加质量浓度 0.2% 的中性红继续培养至空斑出现 取出计数，计算 η PFU 第二篇 微生物学基础 第一章 非细胞结构的超微生物—病毒 第一节 病毒的一般特征及其分类 病毒是没有细胞结构，专性寄生在活的敏感宿 主体内，可通过细菌过滤器，大小在0.2μm以 下的超微小微生物。 流行性感冒病毒 H1N1 禽流感病毒 一、病毒的特点 1 、 个体极小 。 小于0.2μm的超微小微生物，可 通过细菌过滤器。 2 、 专性寄生 。 本身不具备独立的代谢能力，必 须专性寄生在活的敏感宿主细胞内，只能在活的 寄主细胞内生长繁殖，离开寄主细胞不具备任何 生命特征。 3 、不是以二分裂法进行繁殖， 在特定的寄主细 胞内以核酸复制的方式进行增殖。 二、病毒的分类 国际病毒分类委员会提出病毒的分类原则： ①核酸类型、结构和分子量 ②病毒体的形状和大小 ③病毒体的形态结构 ④对乙醚或氯仿的敏感性 ⑤抗原性 ⑥在细胞培养物上的生长特性 ⑦ 对理化因素的敏感性 ⑧宿主种类；传播方式和媒介种类；流行病学特 点及临床病理学特征。 根据病毒的宿主将病毒分为 动物病毒、植物病毒、 微生物病毒等 。 1 、动物病毒 ： 寄生在人体和动物细胞内，包括脊椎 动物病毒和无脊椎动物病毒。 脊椎动物病毒：禽流感、口蹄疫等 人：流行性感冒、麻疹、肝炎、流行性乙型脑炎、 腮腺炎、天花等。 流 行 性 感 冒 病 毒 乙型肝炎病毒 埃博拉病毒（埃博拉出血热） Ebola virus 诺瓦克病毒 ( 引起肠胃感冒） Norwalk virus 家畜：口蹄疫、猪瘟、牛瘟、鸡瘟。 人畜共患：狂犬病病毒 即“猪繁殖与呼吸综合征 ” 猪蓝耳病 无脊椎动物病毒： 主要在节肢动物的昆虫纲中发现，也见于蜘蛛纲、甲壳纲 。 棉铃虫病毒 对虾白斑杆状病毒 2 、植物病毒 寄生在植物体内引起植物疾病 。 烟草花叶病毒 3 、微生物病毒 ： 细菌—噬菌体 真菌—真菌病毒 单细胞藻类—噬藻体 放线菌—噬放线菌体 噬蓝藻体 三、类病毒和朊病毒 ( 一 ) 类病毒 (viroid) 是比病毒更加小的致病感染因子，有类似病毒 的一面，故称类病毒，属于亚病毒或不完全病毒。 在结构组成上比病毒更简单，仅是一个没有蛋白质 外壳的游离的 环状单链 RNA 分子 。 可引起马铃薯纺锤形块状 茎病、柑橘裂皮病和菊矮 化病 。 ( 二 ) 朊病毒（ prion=Protein infection ） 是一类侵染动物并在宿主细胞内复制的无免疫性的 小 分子疏水蛋白质 ，简称蛋白质侵染因子。与羊瘙痒症 、疯牛病、人库鲁病、阿尔茨海默氏症等脑退行性疾 病有关。 第二节 病毒的形态和结构 一、病毒的形态和大小 病毒直径通常在 10- 300nm 之间。大多数病毒 个体直径小于 150nm ，较 大的直径在 250-350nm ， 小的直径 15-30nm 。 痘病毒