空调部件表面微生物、冷却（凝）水中嗜肺军团菌、血清1型（LP1）检测方法.pdfVIP

DB11/ 485—2011 EE 附 录 E （规范性附录） 空调部件表面微生物检验方法 E.1 采样 E.1.1 采样点 在清洗后确定检测的每套空调系统的空调部件选择至少5个 表性采样点。 E.1.2 采样面积 2 每一点采样面积应为50cm 。 E.1.3 采样方法 空调部件表面积尘较 时用刮拭法采样。积尘较少不适宜刮拭法采样时，用擦拭法采样。整个采样 过程应无菌 作。 E.2 样品检测 E.2.1 刮 法 将采集的积尘样品无菌 作称取1g，加入到0.01%Tween-80水溶液中，做10倍梯级稀释，取适宜稀 释度1Ml倾注法接种平皿。 E.2.2 擦 法 将擦拭物无菌 作加入到0.01%Tween-80水溶液中，做10倍梯级稀释，取适宜稀释度1ml倾注法接种 平皿。 E.3 培养与计数 细菌和真菌培养与计数方法见附录C。 18 DB11/ 485—2011 附 录 F （规范性附录） 空调系统冷却 （凝）水中嗜肺军团菌检验方法 F.1 原理 F.1.1 待测水样经过滤膜或离心浓缩后，一部分样品经酸处理与热处理，以减少 菌生长，一部分样 品不作处理。 F.1.2 将上述处理与未处理样品分别接种BCYE琼脂平板并进行培养，生成典型菌落并经生化培养和血 清学实验鉴定确认则判定为嗜肺军团菌。 F.2 主要仪器设 主要仪器设备如下 ——90mm 的平皿； ——35℃～37℃的二氧化碳培养箱； ——波长为360nm±2nm 的紫外灯； ——滤膜滤器； ——孔径为0.22μm～0.45μm 的滤膜； ——蠕动泵； ——离心机； —— 旋振荡器； ——普通光学显微镜； ——荧光显微镜； ——体式镜； ——水浴箱。 F.3 采样 F.3.1 采样容器 可选择玻璃瓶或聚乙烯瓶，沉积物与软泥需用广口瓶，容器均需螺口或磨口，用前 灭菌。 F.3.2 采样量：每个采样点依无菌 作取水样 （或沉积物、软泥等样品）约200ml。 F.3.3 中和 经氯或臭氧等消毒的样品，采样容器灭菌前加入硫 硫酸钠溶液以中和样品中的氧化物。 F.3.4 样品运输与贮存 样品应2天内送达实验室，运输时应避光和防止受热，不需冷冻，室温下贮存 不应超过15天。 F.4 样品处理 F.4.1 沉淀或离心 质可静置沉淀或1000r/min离心1min去除。 F.4.2 过滤：将经沉淀或离心的样品通过孔径0.22μm～0.45μm滤膜过滤，取下滤膜置于15ml灭菌水中， 充分洗脱，备用。 19 DB11/ 485—2011 F.4.3 热处理 取1ml洗脱样品置50℃水浴加热30min。 F.4.4 酸处理 取5ml洗脱样品，pH调至2.2，轻轻摇匀，放置5min。 F.4.5 接种与培养 取F.4.2洗脱样品、F.4.3热处理样品及F.4.4酸处理样品各0.1ml，分别接种GVPC 平板。将接种平板静置于CO 培养箱中，温度为35℃～37℃，CO 浓度为2.5%。无CO 培养箱可采用烛缸培 2 2 2 养法。观察到有培养物生成时，反转平板，孵育10天，注意保湿。 F.5 观察结果 军团菌生长缓慢，易被其它菌掩盖，应每天在体式镜上观察。军团菌的菌落通常呈白色、灰色；菌 落整齐，表面光滑，呈典型毛玻璃状，在紫外灯下，部分有荧光。 F.6 菌落验证 从每一个平皿