生化实验 酵母RNA提取及组分鉴定.pptVIP

@卯城水学 生物化学实验 生物化学实 酵母RNA的提取及组分鉴定 主讲:刘连芬 验 聊城生命科学学院 E-Mail:liulianfen@lcu.edu.cn 酵母RNA的提取及组分鉴定 ,相关知识背景 实验”原理 要验器 以水学 酵母RNA的提取及组分鉴定 相关知识背景 由于RNA的来源和种类很多,因而提取制备方法也 物各异。一般有苯酚法,去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚 化‖法是实验室最常用的方法。组织匀浆用苯酚处理并离心 学‖后,RNA就溶于被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则 留在酚相中,向水层加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉 淀析出,此法能较好的除去DNA和蛋白质,提取的 RNA具有生物活性。 () 生命科学学院 城水弩酵母RNA的提取及组分鉴定 实验原理 工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA,用这两种方法提 生‖取的RNA都是变性的RNA,主要用作制备核苷酸的原料, 物‖其工艺比较简单成本较低。浓盐法是用高浓度的盐处理, 同时加热,以改变细胞壁的通透性,使核酸从细胞内释 学放出来。如用10%左右的NaC溶液90m提取3-4小时, 迅速冷却,提取液离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀 碱法是用稀碱溶液使细胞裂解,然后用酸中和,除去蛋 白质和菌体后 的上清液用乙醉沉淀RNA或调pH25利用等电点沉 生命科学学院 以水学 酵母RNA的提取及组分鉴定 实验原理 酵母含RNA,2.62-10%,DN 以提取RNA參以酵母为原料 物RNA用硫酸水解时,可以先成硝 化‖()强畎使RNA分子中的有机明 学诚中的墙命减 实‖PO43+3NH4+1202+24H=QN 验‖(色)。 (2定磷试剂定:上风 还原成M4,此4价钼再与试剂 2或M3Og,星蓝色,称为钼蓝。 澡浅和磷含量成正比,可用比 生命科学学院