综合实验几种乳制品中酪蛋白和乳糖制备与鉴定修改.pptVIP

三种品牌牛奶中酪蛋白和乳糖的制备与鉴定 1.实验目的 学习从牛奶中分离酪蛋白和乳糖的原理; ≯掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法; 学习常用蛋白质和乳糖的鉴定方法。  2.实验原理 乳制品中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质 其中酪蛋白占了其蛋白质总量的80%。乳制品在pH4.7 时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。酪 蛋白是白色、无味的物质,不溶于水、乙醇等有机溶剂 但溶于碱溶液。乳清蛋白不同于酪蛋白,其粒子的水合 能力强,分散性高,在乳中呈高分子状态。 本实验利用等电点时溶解度最低的原理,将乳制品 的pH调至4.7吋时,酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀 物,除去脂类杂质后使可得到纯的酪蛋白。 乳制品中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖,由D 半乳糖分子与D-葡萄糖分子通过β-1,4糖苷键连接而成 乳糖不溶于乙醇,但乙醇混入乳糖水溶液中,乳糖就会 结晶出米,从而达到分离的目的  三种品牌牛奶中酪蛋白和乳糖的制备与鉴定 3.器材与试剂 三种品牌牛奶、电炉、温度计、pH计、离心机、离心 管、抽滤装置、表面皿(或一次性培养皿)、分析天平(万分 之一)、恒温水浴锅、蒸发皿、烧杯、量筒、试管、吸管。 0.2 mol/L pH4.7的醋酸( NaAc-HAc)缓冲液、冰醋酸 cacO3粉末、95%乙醇、0.9%NaC浴液、茚三削溶液、 10%NaOH溶液、1%CusO4溶液、浓硝酸、本尼迪试剂  4.实验操作 (1)酪蛋白的分离: 将20mL新鲜牛奶盛于50mL离心管中加热到40℃(在水浴锅 屮),在搅拌下馒慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸( NaAc-HAc) 缓冲液20mL(提前在恒温水浴锅中预热)。用冰醋酸调节溶液pH至 4.7(pH讣,小心滴加:如过量,可用NaOH溶液调节),此时有絮 状沉淀析出。将上述悬浮液冷却至室温,离心5min(4000rpm,注 意平衡),上清液转移到烧杯中再加入CaCO3粉末中和冰醋酸(不需 pH计,添加少量,沉淀不溶解即为过饱和。太多CaCO3会吸附上清 液导致乳糖的损失)留作乳糖测定用,离心管中的沉淀即酪蛋白粗品 离心管中沉淀用蒸馏水洗涤3次,每次约20mL(用玻璃棒充分 搅拌),离心5min(3000rpm,注意平衡),弃上清。往离心管的 沉淀屮加入约20mL95%乙醇,搅拌片刻,将离心管中的悬浊液转移 到布氏漏斗抽滤(抽滤至没有明显变化,约20min.可反复操作一次 洗净脂类杂质)。将沉淀转移至表面皿,捣碎摊开风干(置于干燥箱 中,3~4d),得到酪蛋白纯品  (2)乳糖的分离 将上述实验所得的上清液加热煮沸(小烧杯在沸水浴中 加热,通过热变性除去乳清蛋白),趁热过滤,除去沉淀的 蛋白质和残余的CaCO3,将澄清滤液置于蒸发皿中,蒸气浴 (将蒸发皿置于盛水的烧杯上,在电炉上加热至沸)浓缩至5 nL左右(目视确定),冷却后转移至小烧杯(或50mL离心 管),加入20mL95%乙醇,加薄膜密封,4℃放置3~4d (冰箱),让乳糖充分结晶