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外周血单个核细胞分离向分层液离心管中加入稀释的血液样本离心机离心用毛细吸管轻轻插入灰白色层沿管壁轻轻吸出该层的单个核细胞盛入另一支离心管中将所得的单个核细胞悬液用倍体积的液或洗涤次用细胞计数仪或血球计数板计数细胞调整细胞至所需浓度淋巴细胞浓度浓度细胞数四个大方格内细胞数细胞冻存小牛血清的冻存培养液或甘油配制含取对数生长期的细胞用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来悬浮生长的细胞则直接将细胞移至离心管中离心去除胰蛋白酶及旧的培养液加入适量配制好的冻存培养液用吸管轻轻吹打使细胞均匀计数调节冻存液中细胞的
1、外周血单个核细胞Ficoll分离：
向Ficoll分层液离心管中加入稀释的血液样本，1500rpm，5min离心机离心；
i
用毛细吸管轻轻插入灰白色层，沿管壁轻轻吸出该层的单个核细胞，盛入另一支离心管中，将所得的单个核细胞悬液用5倍体积的Hanks液或RPMI-1640洗涤2次，1500rpm，5min；
用细胞计数仪或血球计数板计数细胞，调整细胞至所需浓度；
淋巴细胞浓度浓度（细胞数/mL）=四个大方格内细胞数/4×10 42、细胞冻存：
小牛血清的冻存培养液；20%～10或甘油、10%DMSO）配制含1（．
（2） 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶
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