化学人工酶和生物酶工程4教学教案.ppt

化学人工酶和生物酶工程;;第一节 化学人工酶; Gray与Margalit将电子传递催化剂[Rn钌(NH3)5]3+，与巨头鲸肌红蛋白结合，产生半合成的无机生物酶。肌红蛋白传递氧气， Rn(NH3)5]3+能氧化各种有机物(如抗坏血酸)。接近天然的抗坏血酸氧化酶的活力。（与蛋白结合的优势）;　　美国Schultz小组，寡聚核苷酸链连接到RNA酶的Cys166上。利用寡聚核苷酸链的碱基互补关系，显示出对RNA链特定位点的水解作用。第一个不同于DNA限制性内切酶的RNA限制性内切酶。 　　Kaiser小组 ，黄素木瓜蛋白酶(FP) 木瓜蛋白酶Cys25的巯???参与蛋白质水解反应。8-溴乙酰黄素与此巯基结合后，丧失水解活性，FP催化效率是黄素（黄素氧化还原酶的辅酶）的 1000倍，达到了天然黄素氧化还原酶的活性。;二、全合成酶; 抗体酶的理论基础 半抗原与催化性抗体 抗体酶的制备方法 抗体酶应用;;抗体酶的理论基础;Anti-cancer tumer-targetting abzyme ;Pauling(1948)过渡态理论：酶之所以具有催化活性在于其能够结合并稳定反应底物与产物之间的过渡态构型，降低了底物分子的能量障碍.;S;补充知识点： 如果能够模拟合成出酶催化反应过渡态结构的稳定物质，该物质便能与相应的酶紧密结合，并成为酶的抑制剂，这类物质成为酶的过渡态类似物。;酶与抗体的不同点：酶能够结合并稳定化学反应的过渡态，降低反应的活化能（催化）；而抗体结合的抗原只是一个基态分子，没有催化活性。 酶与抗体的共同点：酶分子与它催化反应的过渡态互补，抗体与抗原互补；酶和抗体都是有生物活性的蛋白质。;Lerner(1984)提出：若以过渡态类似物为半抗原，则其诱发产生的抗体应该与该类似物具有互补构象；这种抗体与底物结合后，能够诱导底物进入过渡态结构，从而引起催化作用。;优势 1 产生新酶 2 立体专一性 3 催化不利的反应过程 应用 医学 药物 抗病毒 工业 化工 材料;;半抗原：是一类小分子化合物，本身不能诱导免疫应答，只有当共价结合到具有免疫性的蛋白质后，注射动物才能诱导出与半抗原特异性结合的抗体；如果半抗原是酶的过渡态结构类似物，则有可能获得具有催化活性的抗体，也就是抗体酶。;;;1、半抗原设计中应考虑： (1)产生的抗体能否具有预期的催化活性。 (2)能否刺激机体免疫应答。;抗体酶的制备方法;1、拷贝法：用已知的酶为抗原免疫动物，获得抗酶的抗体，再用抗酶的抗体免疫动物并进行单克隆化，即可获得抗抗体，抗抗体实际上就是具有原来酶活性的抗体酶。抗抗体（二抗和抗原一样具有和底物结合的能力）;2、修饰法：借助于基因工程和蛋白质工程技术，将催化基团引入到已有底物结合能力的抗体的抗原结合位点上，或采用分于修饰技术，将抗体抗原结合部位的结构改变成为酶分子的活性中心，从而产生有催化活性的抗体。（寡核苷酸定点诱变技术 ；选择性化学修饰法）;3、诱导法：用事先设计好的抗原(半抗原)按照一般的单克隆制备程序，获得具有催化活性的抗体，即抗体酶。;抗体酶的辅因子;抗体酶应用;抗体酶新进展;;;;;意义; 利用各种有机分子(如β-环糊精、卟啉等)和金属离子而制备的具有水解、氧化还原、转氨等功能的全合成酶： (1)氨肽酶全合成酶：三乙撑四胺(Trien)的Co Ⅲ络合物。 (2)转氨全合成酶：Gly甘与Ala丙的西佛氏碱的Cu(Ⅱ)络合物。 (3)ATP水解全合成酶：[CoⅢEdda(H2O2)2]-等。 β-Benzyme人工酶能模拟α-胰凝乳蛋白酶活性（最成功的） 由环糊精制成的人工转氨酶能催化?－酮酸与磷酸吡哆胺专一性地合成氨基酸。;水解酶模拟：　 α-胰凝乳蛋白酶是一种蛋白质水解酶，具有包结底物的疏水性环状结合部位，催化部位中含有57-组氨酸咪唑基、102-天冬氨酸羧基及195-丝氨酸羟基，三者共同织成 “电荷中继系统”在催化底物水解时起着关键作用。近年、模拟α-胰凝乳蛋白酶等水解酶的研究进展迅速，取得一些重要结果。　　 如M.L.Bender等设计合成的β-Benzyme催化醋酸间叔丁苯酯水解反应比酶催化更快，热稳定性和酸碱稳定性高于天然酶。R．Breslow等合成的桥联环糊精与Cu2+的络合物在中性条件下催化一些双疏水部位的水解反应速率比无催化剂时提高1.8×104～2.2×105倍。 ;醛缩酶模拟;桥联环糊精催化羧酸对硝基苯酯的水解;（三）人工聚合物酶 用分子印迹技术制备的人工酶。其原理与抗体酶相同，只是用人工聚合物代替抗体。 以对硝基酚甲基磷酸酯（硝基酚乙酸酯水解反应的过渡态类似物）为模板，得到的有机功能团的聚合物，可以催化硝