高效液相色谱法简介1.ppt

高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography, HPLC  高效液相色谱法的产生和发展 高效液相色谱法( high performance liquid chromatography,HPLC)是20世纪六十年代末在经典 液相色谱法(LC)的基础上引入了气相色谱(GC)的 理论和技术,采用高压泵、高效固定相以及高灵敏度 检测器发展而成的分离分析方法  11HPLc与经典Lc区别 主要区别:固定相差别,输液设备和检测手段 1.经典LC:仅做为一种分离手段 柱内径1-3cm,固定相粒径>100μm且不均匀 常压输送流动相 无法在线检测 2.HPLc:分离和分析 柱内径2-6mm,固定相粒径<10m(球形,匀浆装柱) 高压输送流动相 分析时间大大缩短 可以在线检测  12HPLc与Gc差别 1.分析对象 GC:能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品, 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测,占有机物的20% HPLC:溶解后能制成溶液的样品,不受样品挥发性 和热稳定性的限制,分子量大、难气化、热稳 定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广范, 占有机物的80%  相同:兼具分离和分析功能,均可以在线检测 主要差别:分析对象的差别和流动相的差别 2.流动相差别 GG:流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力,只与固定相作用 HPLG:流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力,为提高柱的选择性、改善分离度增加了 因素,对分离起很大作用,流动相种类较多,选择余地广,流动相极性和 pH值的选择也对分离起到重要作用,选用不同比例的两种或两种以上液 体作为流动相,可以增大分离选择性 3.操作条件差另 GC:加温操作 HPLG:室温;高压(液体粘度大,峰展宽小)