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重组克隆的筛选和鉴定
原理
载体遗传标记法
1抗药性筛选法
2营养缺陷型筛选法
β=半乳糖音酶显色反应选
其它方法
.凝胶电泳检测法
2PCR法
引言
转化子(接纳载体或重组分子的转化细胞)与
非转化子(接纳载体或重组分子的转化细胞)
重组子(含有DNA重组分子的转化子)与非重
组子(仅含有空载载体分子的转化子)
期望重组子(含有目的基因的重组子)与非期
望子(不含目的基因的重组
重组克隆的筛选与鉴定是基因工程中必不可少的
、载体遗传标记法
抗药性筛选法
原理
例如,pBR322质粒上有两个抗菌素抗性基因:
Tet和Ampr
Ter上有插入位点 Bamh I;
Amp上有插入位点PstI
抗药性标记插入失活选择法外源目的序列插入在
载体的抗药性基因中间使这抗药性基因失活,即
抗药性标志消失
四环素+环丝氨酸培养基
pBR322
氨苄青霉
素培养基
外源DNA插入
四环素抗性基因
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