第五章植物脱毒快技术.ppt

1 、外观判断法： 带病毒株往往叶片发黄，凹凸不平，畸形，可根据这 些表现来判断。但有些病毒表现不明显，仅靠这一方法还 不够。 2 、指示植物检测法： 指示植物又称鉴别寄主，指的是对某种或某些特 定病毒非常敏感，而且症状表现十分明显的植物。 通常不同病毒应选用不同的植物。马铃薯病毒常用指 示植物有千日红、曼陀罗、豇豆、辣椒等。 分为 2 种 ①汁液感染法（摩擦接种法） ②嫁接检测法 3 、抗血清鉴定法（抗原－抗体反应） 原理：由于病毒是由蛋白质和核酸组成的，是一种较 好的抗原。将病毒给动物注射后产生抗体。抗原和抗体结 合产生血清反应。抗原：病毒。抗体：是指生物体在外来 抗原的刺激下产生的一种免疫球蛋白，主要存在于血清中， 含抗体的血清称为抗血清。 4 、电子显微镜检查法 直接观察有无病毒存在，并根据病毒的大小、形状和 结构等来判断病毒种类。 5 、酶联免疫吸附测定法 (ELISA) 把抗原 - 抗体的 免疫反应 于 酶的催化反应 相结合而发展 起来的一种综合性技术，灵敏度高，特异性强，发展最快 应用最广的方法。 原理： 采用酶标记的特异抗体指示抗原 - 抗体的结合， 从而检测样品中的抗原定量测定法。 双抗体夹心法 是检测抗原最常用的方法，操作步骤 如下： (1) 将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗 涤除去未结合的抗体及杂质。 (2) 加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间， 让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相 抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 (3) 加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗 体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体 上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 (4) 加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产 物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 五、快速繁殖 茎尖培养得到的脱毒苗不多，用于生产需扩大繁殖。 扩繁方法： 1 ）组培快繁 2 ）无毒苗栽到土壤中进行扩繁。如甘薯、草 莓等利用蔓，马铃薯、姜、蒜等利用地下部分繁 殖。为了预防病毒再感染，扩繁应在培育温室或 防虫罩内，因为昆虫传播病毒。 3 ）两种方法相结合，试管内扩繁，移栽后再 扩繁。 注意： 1 、培养变异的产生，应及时去除 2 、脱毒苗并非永远是无毒苗，由于昆虫等的传播， 不免会再感染病毒，所以要经常脱毒，一般脱毒苗 用 1 － 3 代 。 脱毒试管苗为原原种－－繁殖一代为原种－－原 1 代－－原 2 代 枫树快繁图示 枫树快繁图示 月季快繁图示 月季快繁图示 第五章、植物离体脱毒快繁技术 一、病毒危害 多数栽培植物，尤其 无性繁殖植物 ，都易受 到一种或几种，甚至几十种病毒的侵染。例如， 草莓染 60 多种病毒。并且随着培养时间的推移， 侵染病毒的种类越来越多 。 植物病毒病原体可 通过维管束传导 。因此， 对无性繁殖的植物来说，一旦感染上病毒之后， 就会代代相传 越趋严重 。 受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、 产量 大 幅度下降， 品质 变劣，甚至完全丧失商品价值。 目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药 物处理达到治愈的目的。但还 没有治病毒的特效 药 。种子一般不带病毒 ( 豆类植物除外 ) ，种子繁 殖可得无毒植株。但对于无性繁殖植物， 必须采 取一些特殊方法脱除病毒 。 脱毒快繁的一般过程 1 、诊断：首先了解供试材料感染病毒的种类 2 、茎尖培养脱毒或结合热处理 3 、鉴定 4 、繁殖 5 、驯化移植 1 、热处理脱毒原理： ①病毒进入植物细胞后，随植物细胞 DNA 一起 复制。热处理并不能杀死细胞，只是 钝化病毒的 活性 ，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止， 而失去病毒的侵染能力。 ②热处理是一种物理效应，可加速植物细胞 分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优 势，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因 此 加速分生组织细胞的分裂 ，能够获得无病