基因工程的基本操作程序高中生物选修三122017人教版.ppt

(2) 用上述 3 种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞接种 到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连 接产物是 ________ 。 (3) 目的基因表达时， RNA 聚合酶识别和结合的位点是 ________ ，其合成的产物是 ___________________________________________________________ _____________ 。 (4) 在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切 后产生的末端发生任意连接 , 酶切时应选用的酶是 ________ 。 【答案】 (1) 目的基因—载体连接物 载体—载体连接物 目的基因—目的基因连接物 分离纯化 (2) 载体—载体连接物 (3) 启动子 mRNA (4)EcoR Ⅰ 和 BamH Ⅰ ( 只答一种酶不可 ) 【误区警示】 (1) 切割质粒和目的基因的限制酶一般是同一 种酶，以获得互补的末端，利于重组质粒的构建。 (2) 目的基因的首端和尾端需加上启动子和终止子。 要点三 将目的基因导入受体细胞 不同受体细胞的常用导入方法 受体细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转 化法、基 因枪法、 花粉管通 道法 显微注射 技术 Ca 2 ＋ 处理 法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 受体 细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 转化 过程 以农杆菌转化 法为例 将目的基因插 入 Ti 质粒的 T DNA 上→农 杆菌→导入植 物细胞→整合 到受体细胞的 DNA 上→表达 将含有目的 基因的表达 载体提纯→ 取受精卵→ 显微注射→ 受精卵发育 →获得具有 新性状的动 物 Ca 2 ＋ 处理细 胞→感受态 细胞→基因 表达载体与 感受态细胞 混合→感受 态细胞吸收 DNA 分子 特别提醒 (1) 完成基因表达载体的构建，需 要限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶。 (2)Ca 2 ＋ ( 或 CaCl 2 溶液 ) 对微生物细胞的作用 是增加细胞壁的通透性。 (3) 目的基因能否在植株细胞内稳定保存并表 达的关键是目的基因是否插入到受体细胞染 色体 DNA 上 ( 利用的原理是基因重组 ) 。 科学家通过基因工程的方法，将苏 云金芽孢杆菌的 Bt 毒蛋白基因转入普通棉株 细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了 能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉。其过程 大致如图所示，请分析回答： 例 3 (1)Ti 质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有 T DNA ，把目的 基 因 插 入 Ti 质 粒 的 T DNA 是 利 用 T DNA______________________________ ___________________________________________________________ _ 的特点。 (2)Bt 毒蛋白基因转入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程， 在基因工程中称为 ________________ 。 (3) 将目的基因导入受体细胞的方法有很多种 , 该题中涉及的是 ________________ 。 (4) 目的基因能否在棉株内稳定遗传的关键是 __________________ 。 【解析】 本题以抗虫棉的培育过程为背景 , 考查了运用基因工程技术生产转基因作物的 步骤、方法。 (1)Ti 质粒的最大优点是能将目 的基因导入到受体细胞的染色体 DNA 中，从 而使目的基因在棉花体内稳定维持和表达。 (2) 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细 胞内维持稳定和表达的过程称为转化。 (3) 将 目的基因导入植物细胞的方法很多，以农杆 菌中的 Ti 质粒为目的基因载体的称为农杆菌 转化法。 (4) 目的基因能否在真核生物中稳定 遗传的关键是转基因生物染色体的 DNA 上是 否插入了目的基因。 1 ． 2 基因工程的基本操作程序 学习导航 1. 掌握目的基因获取的常见方法。 [ 难点 ] 2. 学会基因表达载体构建的方法和要求。 [ 重点 ] 3. 理解目的基因导入受体细胞的具体过程。 4. 掌握目的基因检测与鉴定的具体操作。 [ 要点 ] 新知初探思维启动 一、目的基因的获取 1.. 从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物的不同 ______ 的 DNA 片段导 入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含 有这种生物不同的基因，称为基因文库。 基因 基因文库包括两种： ________ 文库，即包含 一种