YYT I型胶原蛋白分子量检测.pdfVIP

ICS 11.040.30 C 30 YY 中 华 人 民 共 和 国 医 药 行 业 标 准 2 I 组织工程医疗器械产品 胶原蛋白 第 部分： 型胶原蛋白分 子量检测——十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法 Tissue engineering medical device products collagen protein Part 2: Determination of molecular weight of type I collagen——Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electriophoresis 国家药品监督管理局 发 布 目 次 目 次 I 前 言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语及其定义 1 4 原理 1 5 缩略语 1 6 试剂及其配制 1 7 仪器和设备 2 8 操作方法 2 9 结果计算 4 10 可接受准则…………………………………………………………………………………………………5 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 II 组织工程医疗器械产品 胶原蛋白 第2 部分：I 型胶原蛋白分子量 检测——十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法 1 范围 本标准规定了用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）测定I 型胶原蛋白分子量的 方法。本标准适用于组织提取的I 型胶原蛋白分子量的测定。 注：重组胶原蛋白肽可参考本方法进行其分子量测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 YY T 1453-2016 组织工程医疗器械产品 I型胶原蛋白表征方法 《中华人民共和国药典》。 3 术语及其定义 YY T 1453-2016 中的术语和定义适用于本文件。 4 原理 SDS分离蛋白质的原理是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠 （SDS ）按重量比结合，形成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然胶原蛋白分子的净 电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质按分子量大小分离。根据蛋白质分子量标准品 在电泳中的迁移距离和其相对分子质量的对数值成正比的关系拟合标准曲线，根据样品的迁移率可 计算出样品相对分子质量的近似值。 5 缩略语 a）三羟甲基氨基甲烷：Tris ； b ）三羟甲基氨基甲烷盐酸：Tris-HCl ； c ）十二烷基硫酸钠：SDS； d ）四甲基乙二胺：TEMED ； e ）分子量标准品：Marker ； f ）甘氨酸：Gly； g ）盐酸：HCl 。 6 试剂及其配制 6.1 试剂要求 a）所用试剂均为分析纯及以上； 1 YY/T XXXXX—XXXX b ）纯化水电阻率不低于18.2 MΩ·cm ； c）Ⅰ型胶原蛋白标准品建议用国家标准品； d）分子量标准品的分子量范围应含盖供试品的分子量。 注：由于动物种属不同，其组织提取的胶原蛋白分子量存在差异，宜根据拟测试样品的动物种属不同选择相 同种属动物组织来源的Ⅰ型胶原蛋白标准品 （如牛I型、猪I型等）。 6.2 试剂及试剂配制 a ）30 % 丙烯酰胺 （A 液）：精确称取丙烯酰胺