DNA测序技术概述..pptVIP

DNA测序技术概述（The overview of DNA sequencing technology ）;主要内容;第一代DNA测序技术;链终止法;利用DNA聚合酶不能够区分dNTP和ddNTP的特性，使ddNTP参入到寡核苷酸链的3’-末端。因为ddNTP 3’不是-OH，不能与下一个核苷酸聚合延伸，从而终止DNA链的增长。;双 脱 氧 链 终 止 法 测 序 示 意 图;链终止技术路线与要求;通过M13载体获得单链DNA以测序;在每一反应试管中，都加入一种互不相同的ddNTP和全部4种dNTP，其中ddNTP带有32P同位素标记。反应混合物样品加在聚丙烯酰胺凝胶中，按片段大小进行电泳分???。谱带的判读是从胶的底部开始，所得的核苷酸碱基顺序，与模板链为互补链。;DNA测序自动化（第一代）;用不同的荧光色彩标记ddNTP,如ddATP标记红色荧光, ddTTP标记绿色荧光,ddCTP标记蓝色荧光, ddGTP标记黄色荧光,由于每种ddNTP带有各自特定的荧光颜色,而简化为由1个泳道同时判读4种碱基.产物条带经过检测仪时给出特定信号，由计算机判读并记录。 ;第一代半自动测序示意图;第一代全自动测序 ——毛细管电泳测序;DNA样品通过一束充满凝胶的毛细管进行电泳，利用共聚焦荧光扫描显微镜，可将核苷酸的荧光标记信号放大，并由计算机读取碱基顺序。;化学降解法;化学降解法基本原理：;化学法测序;;;化学修饰法的测序过程;同时完成4组反应，A、G、C、T 链终止法：主流技术，易于机械化自动控制。 化学降解法：试剂含有毒性。;化学降解法技术路线;第二代DNA测序技术;454 (GS-FLX);工作原理;454 (GS-FLX)流程;DNA芯片测序法;;;第三代DNA测序技术;（选自2010年第8期《生物技术通报》中《DNA测序技术的发展历史与最新进展》;;DNA测序技术引领中国基因组科学走向未来(《中国科学》2010 年第 40 卷第 12 期: 1169 ~ 1172) 下一代测序技术_技术回顾与展望(《中国科学》2010 年 第40 卷 第1 期: 23 ~ 37);