多肽化学合成.ppt

树脂的选择 ? 将固相合成与其他技术分开来的最主要的特征是固相 载体，能用于多肽合成的固相载体必须满足如下要求： ? 必须包含反应位点（或反应基团）； ? 必须对合成过程中的物理和化学条件稳定； ? 允许在不断增长的肽链和试剂之间快速、不受阻碍的接触； ? 提供足够的连接点，以使每单位体积的载体给出有用产量的 肽，并且必须尽量减少被载体束缚的肽链之间的相互作用。 主要有三类： 聚苯乙烯 - 苯二乙烯交联树脂 聚丙烯酰胺 聚乙烯 - 乙二醇类树脂及衍生物 固相法合成多肽的高分子载体 CH CH 2 CH CH 2 CH CH 2 CH CH 2 聚苯乙烯树脂 CH CH 2 CH CH 2 CH CH 2 COOH NH 2 CH 2 Cl ? 这些树脂只有导入反应基团，才能直接连上第一个氨基酸； ? 根据所导入反应基团的不同，又把这些树脂及树脂衍生物分 为 氯甲基 树脂、 羧基 树脂、 氨基 树脂； ? 氨基酸的固定主要是通过保护氨基酸的羧基同树脂的反应基 团之间形成的共价键来实现的。 固相法合成多肽的高分子载体作用 ? 氯甲基树脂： 通常先制得保护氨基酸的四甲铵盐或钠盐、钾 盐、铯盐，然后在适当温度下，直接同树脂反应或在合适的有 机溶剂如 DMF 或 DMSO 中反应； ? 羧基树脂， 通常加入适当的缩合剂如 DCC 或羧基二咪唑，使 被保护氨基酸与树脂形成共酯以完成氨基酸的固定； ? 氨基树脂或酰肼型树脂， 加入适当的缩合剂如 DCC 后，通过 保护氨基酸与树脂之间形成的酰胺键来完成氨基酸的固定。 高分子载体共价键形成的方法 ? 在固相合成绝大多数常用二氯甲烷为溶剂； ? a- 氨基用 Boc （叔丁氧羰基）保护的称为 Boc 固相合成法， ? a- 氨基用 Fmoc （芴甲氧羰基）保护的称为 Fmoc 固相合成法。 固相合成法的类型 丁氧羰基（ Boc ）固相合成法 ? 侧链保护基采用苄醇类； ? 常用树脂为氯甲基化聚苯乙烯树脂或羟甲基化聚苯乙烯树 脂或对乙酰基苄脂树脂； ? Boc 保护 α - 氨基的氨基酸衍生物共价交联到树脂上，用 TFA 脱除 Boc ，三乙胺中和游离的氨基末端 ? 再偶联下一个氨基酸， …… 。 ? 缺点： 反复用酸脱除保护基，然后用氟化氢把肽段从树脂 上裂解下来，不可避免地会引起或多或少的副反应；某些 侧链保护基的不稳定，已经延长的肽链从固相支持物上的 逐步损失，还有天冬氨酸、谷氨酸残基的侧链变化 …… 树脂 CH 2 Cl t Boc NH CH R 1 COO - CH 2 树脂 t Boc NH CH R 1 COO CF 3 COOH 或 HCL/CH 3 COOH 树脂 CH 2 NH 2 CH R 1 COO t Boc NH CH R 2 COO - DCC NH CH R 1 COO CH 2 树脂 t Boc NH CH R 2 CO 丁氧羰基（ Boc ）固相合成法 多肽的化学合成 多肽的化学合成 ? 多肽的化学合成，是按照设计的氨基酸顺序，通过定向形成 酰胺键方法得到目标多肽分子； ? 氨基酸之间形成酰胺键的反应相当复杂； ? 要成功的合成具有特定氨基酸顺序的多肽，必须采用定向形 成酰胺键方法，即对暂时不参予形成酰胺键的氨基和羧基， 以及侧链活性基团进行保护。同时还要对羧基进行活化。 （一）氨基酸常用的保护方法 保护基必须具备的条件 ? 易在预定的部位引入，在接肽时能起保护作用； ? 在某特定的条件下，保护基很易除去； ? 引入和除去保护基时，分子中的其它部位 不会受到影响，特别是已接好的肽键。 1. 氨基保护 2. 羧基保护 3. 侧链保护 4. 接肽方法 多肽合成必须解决下面四个问题 1 、氨基的保护 ? 常用氨基保护基的方法： 酰化 ? 最广泛应用的氨基保护基 (PG) 是叔丁氧甲酰基 (t-Boc) ? 三苯甲基、对甲苯磺酰基、芴甲氧羰基（ Fmoc) ，可用 HBr/CH 3 COOH 在室温下除去； ? 苄氧酰基（ CBz ），通过催化加氢或用金属钠在液氨中处理 除去； （ 1 ）用芴甲氧羰基保护 ? Ｎ'－芴甲氧羰基（ Fmoc ）基团作为保护基的优点： ? Fmoc 基团可被碱脱除 ? 对酸稳定，用三氯乙酸较强酸处理不受影响； ? 仅用温和的碱处理，通过 β - 消除反应即可脱去，不需要三级胺 中和； ? Fmoc 基团有特征性的紫外吸收，易于监测反应的进行，给使 用仪器自动化合成多肽带来许多方便。 （ 2 ）用叔丁氧羰基保护 t-Butoxycarbonyl 简写 BOC O (C H 3 ) 3 COC- ? t-Boc 是常用的氨基保护基。 ? 二叔丁基二碳酸酯与氨基酸作用，形成 t-Boc- 氨基酸，可 以有效地保护氨基； ? t-Boc 基