现代科技综述知识文库：脑薄片技术.pdf

现代科技综述系列—— 脑脑薄薄片片技技术术 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “脑薄片技术” 的解读，以供大家了解。 脑脑薄薄片片技技术术 从动物脑或脊髓制备可离体存活、厚度为100～700μm 的组织切片进行细胞电生理学研究的技术。 脑薄片取材于脑或脊髓的各个部位，除进行以微电极 技术为核心的生物电记录 分析外，还用于神经科学 各个领域的研究。 该技术具有标本易于处理、定位准确、记录稳定、条 件易于控制、神经元间保存联系及可进行多学科综合 研究等优点，是从细胞乃至分子水平探索中枢神经系 统奥秘的重要手段。 1924年，瓦尔堡(D ．Warburg)在能量代谢研究中首次 证实离体脑组织具有生物学活性后，1950年墨克伊魏 因(H ．Mcllwain)开始将各种动物脑组织存于改正的 Kreb 液中进行多种物质代谢的生化研究，并应用电刺 激 药物处理方法。 1957年，李(C-L ．Li) 墨克伊魏因首次在新皮质脑片 进行神经元细胞内记录，证明它具有相似于在体神经 元的电生理、突触反应 自发放电，并进行神经递质 及药物作用的研究。 嗣后，安德森(P ．Ander en)及坎德尔(E ．R ．Kandel)等 实验室建立的海马脑片技术，并在以后的20年中成为 重要的神经科学研究手段之一。 随后，小脑(1973)、下丘脑(1975)、新纹状体(1979)及 脑干(1982)等脑薄片技术也相继建立。 中国80年代初主要用海马脑片进行场电位记录，80年 代末中国科学院上海生理所、皖南医学院等单位则开 展了细胞内记录工作。 1978年高桥(T ．Takaha hi)用琼脂凝块包埋切片法制备 了新生大鼠脊髓薄片(130～150μm)，在相差显微镜直 视下进行运动神经元(MN)细胞内记录。 随后仁司(S．Ni hi，1982) 诺思(R ．A ．North ，1983) 实验室先后用成年猫 大鼠制备脊髓薄片，开展交感 节前神经元(SPN)、背角细胞内生物电记录 研究。 目前最常用的400～500μm厚新生大鼠脊髓切片技术由 朗迪奇(M ．Randic)实验室率先使用，但局限于背角神 经元的研究。 1984年，邓(N ．J ．Dun)实验室开展了SPN及MN 的研 究。 国内安徽医科大学(1988) 皖南医学院(1990)也分别开 展了新生大鼠脊髓切片SPN MN 的细胞内记录研究。 80年代中期以来，脑薄片技术得到了进一步发展。 首先是震荡切片机克服了中枢神经组织极软弱易挤压 问题，使脑片工作几乎涉及脑 脊髓的各个部位。 同时，脑片制备向特定解剖或功能部位或核团发展， 如扣带回、视皮质、蓝斑等脑片。 其次，制备保留传入传出联系的脑片，如脊髓的切片 保留腹、背根，倾斜纹状体切片具有与大脑皮质 苍 白球的联系通路。 另外，联合脑片制备为研究不同部位间相互联系奠定 了基础，海马结构中海马与齿状回联合脑片成为记忆 生理、癫痫病理研究的重要手段。 耶弗蒂尼亚(S．Jeftinij ，1988)制成的新生大鼠脊髓薄 片－背根神经节联合标本，可进行背角 神经节细胞 的同步记录。 而新生大鼠脊髓－外周神经标本，海龟脑干－听觉传 入通路标本也是一些成功的例子。 单电极电压钳首先由魏尔桑(W ．A ．Wil on)等(1975)应 用于脑薄片研究，膜电流分析对一些电生理现象的离 子机制阐明至关重要。 汪(M ．Y ．Wang)等在MN证明5 －HT通过增大或减小 钾电导而诱发外