现代科技综述知识文库：漆酶.pdf

现代科技综述系列—— 漆漆酶酶 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “漆酶” 的解读，以供大家了解。 漆漆酶酶 漆酶(EC 1．10 ．3 ．2是含铜氧化还原酶，主要有漆树 漆酶 真菌漆酶两类，分别来源于漆树液(生漆) 真 菌。 研究漆酶的结构与功能、金属铜离子的作用与配位环 境、催化反应、氧化还原 电子传递过程等，不仅为 人们了解天然体系、探索生命现象提供信息，而且对 天然资源的开发、应用都具有重要意义。 1883年，日本吉田首次从日本生漆(即中国生漆) 中发现 漆酶，但他没有深入研究。 后来，伯查德(Bertrand) 凯林(Keilin)分别从越南生漆 中国生漆中分离出漆酶，发现它能催化氧化漆酚、 邻苯二酚、对苯二酚、连苯三酚等多元酚。 1897年，拉波德(Laborde)发现真菌类植物中有一种酶 具有漆树酶一样的催化活性，因而称真菌漆酶。 此外，还在紫花苜蓿、毒莴苣、马铃薯、毛地黄、香 蕉、咖啡豆、苹果等植物中发现漆酶。 不同来源的漆酶化学组成也有差别(表1) 。 表1 漆酶的分子量、含糖量 含铜量 按光谱 磁学性 质可以将漆酶中的铜离子(Cu2+)分为3类：Ⅰ型铜离子 Ⅱ型铜离子各1个，Ⅲ型铜离子两个。 Ⅰ型铜离子呈蓝色，在λ 14nm处有特征吸收；Ⅱ型铜 离子非蓝色，没有特征吸收光谱。 Ⅲ型铜离子是偶合的离子对(Cu2+ －Cu2+)，在λ330nm 处有宽的吸收峰。 Ⅰ型铜离子 Ⅱ型铜离子呈顺磁性，可用ESR检测， Ⅲ型铜反磁性，一般条件下ESR检测不出。 Ⅱ型铜离子可选择性地除去，得部分脱辅基漆酶，即 T2D(Type Ⅱ Cudepleted)漆酶。 T2D漆酶无催化活性，用Cu+离子重建可使其恢复天然 酶活性。 Ⅰ型铜离子可用Hg2+或Co2+离子取代，得部分取代的 漆酶，它的催化活性比天然漆酶低。 由于漆酶的含糖量较高，难以得到X －射线分析用的漆 酶单晶，它的三维空间结构还不清楚。 根据光谱、磁学性质 实验事实推测，漆酶中铜的配 位结构为Ⅰ型铜离子分别与Cys、Met 中的两个硫、两 个His中的氮原子配位，形成变形的四面体。 Ⅱ型铜离子是四方配位，分别与2个或3个His中的氮 两个或一个氧原子配位，氧化型的Ⅱ型铜离子含氧配 体可能是水或羟基。 Ⅲ型铜离子中的2个铜分别与3个His中的氮配位，又同 时与Tyr 的氧配位形成氧桥。 漆酶的底物专一性不强，据1989年初步统计漆酶的底 物已超过200个。 按底物结构可分为5类：(1)酚类及其衍生物，它们约占 漆酶底物总数一半以上，包括邻苯二酚、对苯二酚、 间苯二酚、α及β萘酚、硫酚、甲基酚及其衍生物等， 真菌漆酶还可催化一元卤代酚的氧化。 一元酚衍生物取代基一般在酚羟基的邻、对位。 随取代基数目、种类 位置不同，反应活性也有差 异。 如漆酶催化下列一元取代酚氧化的活性次序分别为：P －甲酚＞0 －甲酚＞m －甲酚》苯酚；2 ， －二甲氧基 酚＞2 ， －二甲基酚＞邻甲氧基酚＞邻甲基酚。 (2)芳胺及其衍生物，它们的结构除氨基外与酚类相 似，还有N ，N －二甲基对苯二胺，1，5 －萘二胺，联 苯胺等。 (3)羧酸及其衍生物，局限于芳环连有羟基或氨基的芳 香酸、碳链连有酚或芳胺基团的羧酸及其酯。 如原儿茶酸、原儿茶酸甲、丁、戊酯，3 ，4 －二羟基 苯乙酸等。 (4) 甾体激素