实验二 血红蛋白及其衍生物吸收光谱及.pptVIP

实验二血红蛋白及其衍生物 的吸收光谱及定量测定 目的要求 1、掌握722型分光光度计的使用。 2、了解血红蛋白及其衍生物的吸收光谱的测 定 3、掌握血红蛋白标准曲线的绘制 、实验原理 血红蛋白(Hb)与O2结合生成氧合血红蛋白 (HbO2),与CO结合生成一氧化碳血红蛋白 (HbCO),因其血红蛋白分子结构不同,当光 线分别透过各种Hb溶液时,所吸收的光波也各异, 可显出特有的吸收光谱。这些吸收光谱可作为 们定性和定量分析的基础,如HbO2在可见光波长 400~600nm范围内有三个特征的吸收峰,其峰值 分别在415、541和576nm处,当氧合血红蛋白转 为一氧化碳血红蛋白(HbCO),此时光谱发生 改变,在波长419、540和569nm处出现三个特征 的吸收峰,其中在500~600nm范围内三个特征的 吸收峰如下图。 2310,歌舞石 232Bc0歌数角西 本实验先制备Hb及其衍生物,然后 在不同波长下测其光吸收度,以吸光 度(A)(又称光密度)为纵坐标,波 长为横坐标绘制成吸收光谱曲线,由 此可以确定它们最大的吸收波长。 三、仪器和试剂 1.仪器:试管及试管架;吸量管;滴管和 量筒;722型分光光度计;CO发生器 2.试剂 (1)浓H2SO4; (2)甲酸; (3)蒸馏水 (4)血红蛋白溶液