实验二细胞色素C制备和检测.pptVIP

实验三、细胞色素C的制备和测定 生命科学院:刻红玲 、目的要求: ■1、通过细胞色素C的制备,了解制备蛋白质品 的一般原理和步骤 ■2、掌握制备细胞色素C的操作技术及含量测定 方法 原理 细胞色素C包括多种能够传递电子的含铁蛋 白质总称。 存在于各种动植物组织和微生 物中。它是呼吸链中极重要的电子传递体,细 胞色素C( cytochrome c,cytC)只是细胞色 素的一种。它在呼吸链上位于细胞色素还原酶 和细胞色素氧化酶之间。线粒体中的细胞色素 绝大部分与内膜紧密结合,仅有细胞色素C结 合轻松,较易被分离纯化 细胞色素C为含铁卟啉的结合蛋白质,每 细胞色素C分子含有一个血红素和一条多 口肽链。分子质量约为1300,蛋白质部分由 04个左右的氨基酸残基组成,其中赖氨酸 含量较高,等电点10.2-10.8,含铁量0.37- 0.43%。它易溶于水,在酸性溶液中溶解度 更大,故可用酸性水溶液提取。细胞色素C 的传递电子作用是由于细胞色素C中的铁原 子可以进行可逆的氧化和还原反应,故可分 为氧化性和还原性,前者水溶液呈深红色, 后者水溶液呈桃红色。细胞色素C对热,酸 和碱都比较稳定,但三氯乙酸和乙酸可使之 变性,引起某些失活 细胞色素C是一种细胞呼吸激活剂。在 临床上可以纠正由于细胞呼吸障碍引起的 系列缺氧症状,使其物质代谢、细胞呼吸恢 复正常,病情得到缓解或痊愈。在自然界中 细胞色素C存在于一切生物细胞里,其含量 与组织的活动强度成正比。本实验以新鲜猪 心为材料提取制备和纯化细胞色素C,得到 其粗品溶液,方法简单易操作 试验材料和方法 1、材料:新鲜(冷冻)牛心样品 2、试剂 (1)25%(NH4)2SO4,12%BaCl2,联二亚硫 酸钠。 (2)人造沸石:白色颗粒,不溶于水,溶于酸。 选用60-80日。 (3)20%三氯乙酸(TCA)、1mo/LH2SO (555m/L)、1mol/LNH4OH(67.6ml/L)溶 液、0.2%NaC、细胞色素C标准液(1mg/m)、 1%AgNO3° 3、仪器:绞肉机、电磁搅拌器、离心机、分光光 度计、透析袋等