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实用标准文案 环境中微生物的检测和分离纯化 姓名：王韬 班级：生 76 组号： 7-2 组 同组人：袁堂谧 实验日期： 2009-11-12 一、 实验目的： 1. 熟悉常用微生物培养基配置方法。 2. 联系无菌操作技术。 3. 学习单菌落划线分离法。 4. 通过实验认识环境中微生物的分布。 二、 实验原理： 1. 微生物的分离与纯化： 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的 过程称微生物的分离与纯化。 常用的是平板分离法。 为了获得某种微生物的纯培养， 一般是根据该微生物对营养、酸碱度、温度和氧的条件要求不同，而供给他们适宜 的培养条件，或加入某些抑制剂造成一支其他菌生长而利于此菌生长的环境。 2. 平板菌落计数法：平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分 分散成单个细菌，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长 繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品的一个单细胞。该计数法 最大的优点是可以获得活菌的信息。 三、 实验材料： 土壤悬液（稀释 100 倍），未知菌菌落平板，无菌水，取液器，培养箱，培养皿，无菌 涂棒，接种环，接种针，酒精灯。 四、 实验步骤： ( 一 ) 培养基的制备（提前准备） ： 肉汤蛋白胨培养基： 牛肉膏 2g 蛋白胨 4g NaCl 2g 蒸馏水 400mL 琼脂 8g 1. 称量：按上述配方称量各类物质。 2. 溶解：在 400mL水中溶解牛肉膏、蛋白胨和 NaCl，混合加热溶解。 3. 调 pH值：调至 7.2-7.4 4. 过滤（本实验无需过滤） 5. 加凝固剂：加入称量好的琼脂，混合均匀。 6. 分装 7. 包扎和灭菌 8. 倒平板 ( 二 ) 从土壤中分离微生物 1. 采土样 （已事先准备）：选择较肥沃的土壤，铲去表层土， 挖 5-20cm 深度的或 精彩文档 实用标准文案 特殊要求的土壤数十克，装入已灭菌的牛皮纸袋，封好袋口，做好编号记录。 2. 制备土壤稀释液（已事先稀释至 100 倍）：称取 1.0g ，放入盛 99mL 无菌水并 -2 带有玻璃珠的三角瓶中， 置摇床振荡 5min 使土壤均匀分散成土壤悬液 （10 ）。 3. 继续稀释土壤悬液至合适浓度： 用无菌吸头从上述稀释液中吸取 0.1mL 土壤悬 液，注入事先装有 0.9mL 无菌水的 Ep 管中，用同样的方法，分别配置浓度为 -3 -4 -5 10 ， 10 ， 10 的土壤溶液。 4. 涂布： 用一只新的无菌吸头， 分别吸取各浓度的土壤悬液均匀地注入装有培养 基的平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度 3 个板。 5. 培养：将平板倒置与 37℃温箱中培养 24h ，统计所长出的菌落数。 6. 菌落计数 ( 三 ) 周围环境中微