王镜岩生物化学氨基酸.pptVIP

甘 氨 酸 滴 定 曲 线 ? 对于侧链含有可解离基团的 AA ? p I 取决于两性离子两边 p K 值的算术平均值 ? 酸性 AA ： p I = (p K 1 + p K R-COO - )/2 ? 碱性 AA ： p I = (p K 2 + p K R-NH2 )/2 四、氨基酸的化学反应 （一） α - 氨基参加的反应 1. 与亚硝酸反应 2. 与酰化试剂反应 3. 烃基化反应 4. 形成 Schiff s 碱反应 5. 脱氨基反应 NH 2 OH R CH COOH + HNO 2 R CH COOH+H 2 O+N 2 ? Van Slyke 法测氨基氮（体积）的基础。 ? N 2 中的 1/2 为氨基氮。 氨基酸定量和蛋白质水解程度的测定。 NO 2 F O 2 N + H 2 N — CH — COOH R NO 2 O 2 N HN — CH — COOH R + HF 弱碱性 DNP - 氨基酸 （ 黄色 ） DNFB Sanger 法测定 N 末端氨基酸基础 — N=C=S + N — CH — COOH H H R PITC — N — C — N — CH — COOH H H R S PTC- 氨基酸 — N — C H R S N C C O PTH- 氨基酸 pH8.3 无水 HF 苯异硫氰酸酯 PITC 苯氨基硫甲酰衍生物 苯乙内硫脲衍生物 Edman 降解法基础 R COOH R COO C=O + H 2 N CH C=N CH H R H R 醛 氨基酸 Schiffs 碱 -H 2 0 +H 2 0 在生物体内经 AA 氧化酶 催化 即脱去 α - 氨基而转变为酮酸。 （二） α - 羧基参加的反应 1. 成盐或成酯反应 2. 成酰氯反应 3. 脱羧基反应 4. 叠氮反应 （ 2 ）成酯 NH 2 干燥， HCl R CH COOH + C 2 H 5 OH 回流 R CH COOC 2 H 5 + H 2 O NH 3 · Cl 保护羧基 （ 1 ）与 NaOH 等形成盐 HN- 保护基 R — CH-COOH + PCl 5 HN- 保护基 R — CH-COOCl + POCl 3 + HCl 保护氨基 活化羧基 NH 2 脱羧酶 R — CH-COOH R-CH 2 -NH 2 +CO 2 YNH O NH 2 NH 2 R — CH — C — OCH 3 YNH O HNO 2 R — CH — C — NHNH 2 YNH O R — CH — C — N - — N + N + 2H 2 O 酰化氨基酸甲酯 肼 酰化氨基酰肼 酰化氨基酰叠氮 肽的人工合成 （三） α - 羧基和 α - 氨基都参加的反应 1 、 与茚三酮反应 2 、 成肽反应 弱酸 加热 （四） 侧链 R 基参加的反应 1 、 Tyr 2 、碱性 AA 2 、碱性 AA 3 、带硫 AA O NH 2 OH OH I I O N H 2 O H O H I O N H 2 O H O H O 2 N NO 2 O N H 2 OH O H NO 2 Tyr 酚基在 3 和 5 位上易发生亲电取代反应， 如碘化和硝化 黄色反应 N N N N O N H 2 O H OH HO 3 S HO 3 S Pauly 反应 N N N H N N N CH 2 CH COOH NH 2 HO 3 S HO 3 S His 侧链咪唑基 与重氮苯磺酸生 成棕红色化合物 Pauly 反应 Arg 侧链胍基与 环己二酮生成 缩合物 Trp 侧链吲哚基能被 N- 溴代琥珀酰亚胺氧化 —— 分光光度法测定 Trp 含量 Met 侧链上甲硫基：强亲核基团与烃化试剂成锍盐 保护巯基 与二硫硝基苯甲酸发生硫醇 - 二硫化物交换 pH8.0 时 412nm 最大光吸收 — 分光光度法测定 -SH 2R-SH + 1/2O 2 R-S-S-R + H 2 O Cys 的巯基不稳定，易被氧化成二硫键 巯基在有痕量的金属离子如： Cu 2+ ， Fe 2+ ， Co 2+ 或 Mn 2+ 时，易被氧化 (Amino Acid, AA, Aa, aa) 第 3 章 氨基酸 —— 蛋白质的构件分子 Protein Architecture 一、氨