动物细胞培养产酶.pptVIP

第二节 动物细胞培养产酶 XSL 动物细胞培养用来生产： 疫苗 激素 多肽生长因子 单克隆抗体 酶：哪些酶？ 动物细胞培养用来生产： 疫苗 激素 多肽生长因子 单克隆抗体 酶：胶原酶、尿激酶、纤溶酶原活化剂 一、动物细胞的特性对比：动物细胞培养、植物组织培养 二、动物细胞培养的特点： 生长慢 防止微生物污染，怎么办？ 对环境、剪切敏感 细胞具有锚地依赖性，贴壁生长 培养基成分复杂，要加血清 原代细胞培养50代后会死亡 反应过程成本高，产品价格贵。 三、动物细胞培养的过程、方式 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 动物细胞培养过程 动物细胞培养过程 动物细胞培养方式 悬浮培养 瘤细胞、淋巴细胞 贴壁培养 滚瓶培养、玻璃瓶、塑料瓶 微载体培养 葡萄糖凝胶 固定化细胞培养 典型动物细胞培养条件 无菌、无毒 消毒、灭菌 抗生素 定期更换培养液，清除代谢废物 营养 合成培养基：糖、氨基酸、生长因子、无机盐、微量元素 （血清、血浆） 温度和pH 36.5±0.5℃，7.2---7.4 气体 95%空气，5%CO2 应用 动物细胞培养技术总结动物细胞特性 无细胞壁 适应环境能力差 十分脆弱 营养要求复杂 必须供给维生素、氨基酸、生长因子、激素等. 培养基中要加5%-10%血清 细胞具有群体效应 具有相互依赖性,达到一定密度才能生长 动物细胞只能贴壁生长 动物细胞培养特性 生长缓慢 易污染,培养中要加抗生素 加青霉素、链霉素 防止支原体污染，加卡那霉素、金霉素 细胞贴壁培养 具相互依赖性, 必需达到一定密度 动物细胞对剪切敏感 原代细胞培养50代后会退化死亡 动物细胞培养工艺- 培养基除菌 过滤、蒸汽 温度控制 37 渗透压控制 pH控制 微碱性为好 二氧化碳培养箱，浓度5% 溶氧控制 目前通过动物细胞培养得到的酶主要有 胶原酶、尿激酶、纤溶酶原活化剂 tPA 1.细胞种类：猫角膜内皮细胞；2.培养的天数：2W3.放大倍速：倒置显微镜 200× ；4.培养基种类：1640+10%小牛血清（四季青）；5.细胞状态与特征简述:细胞高密度时呈3－6边形铺路石样生长 无菌操作台 倒置显微镜 倒置显微镜和25T培养瓶 .植物组织培养的条件 .概念 .植物组织培养的条件 .概念 .植物组织培养的条件 .概念 * * * * . . 无 有 脱分化 贴壁，群体效应 可悬浮 生长 细胞或细胞产物 快速繁殖植物 目的 较大 最大 大小 液体、营养物质、血清等 固体、营养物质、激素 培养基 无，对环境敏感 有 细胞壁 动物细胞培养 植物组织培养 . 应用. 动物细胞培养 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 （分解弹性纤维、胶原蛋白） 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 遗传物质改变 遗传物质未改变 . 归纳过程. .过程、原理、结果 .培养条件 动物组织 分散成单个细胞 细胞悬液 培养 （原代 传代 培养 培养） 胰蛋白酶 胶原蛋白酶 胰蛋白酶 胶原蛋白酶 原理： 细胞增殖（有丝分裂） 结果： 细胞群，细胞产物 动物细胞培养的方式； (1)悬浮培养(suspension culture) (2)贴壁培养(anchorage-dependent culture) (3)贴壁－悬浮培养及固定化细胞培养 微载体培养(microcarrier culture) 包埋(entrapment)和微囊(microencapsulation)培养 结团培养(aggregate culture) .植物组织培养的条件 .概念 四、动物细胞培养的工艺条件及其控制 培养基 ①天然培养基 ②合成培养基 ③无血清培养基 培养条件的影响与控制 （1）温度：一般控制在36.5℃. （2）pH值：一般控制在7.0-7.6的微碱性范围内。 （3）渗透压: 应与细胞内渗透压相同。 （4）溶解氧：根据情况随时调节。 .植物组织培养的条件 .概念 思考： 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？ 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 思考： 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？ 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成