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成体干细胞 是分布在成体组织中尚未分化的、具有自我更新、并能构建和补充相应组织各种类型细胞潜能的干细胞。 造血干细胞 神经干细胞 胰岛干细胞 皮肤干细胞 造血干细胞是能自我更新、有较强分化发育和再生能力、可以产生各种类型血细胞的一类细胞。 造血干细胞 * * 定 义 种 类 组织工程 研究概况 干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。 增殖 分化 干细胞的分类 按发育阶段分类 胚胎干细胞 成体干细胞 按分化潜能分类 多能干细胞 全能干细胞 专能干细胞 细胞的发育潜能 全能性：细胞含有使后代细胞形成完整个体的 潜能,称为细胞的全能性。 多能性：细胞虽具有分化出多种组织的潜能,但 却失去发育成完整个体的能力，细胞 的这种发育潜能称为细胞的多能性。 单能性：细胞只能分化出一种细胞，细胞的这 种分化 潜能称为细胞的单能性。 全能干细胞:具有形成完整个体的分化潜能的干细胞. 多能干细胞:具有分化多种细胞组织的潜能,但却失去了发育成完整个体的能力的干细胞. 专能干细胞:只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化的干细胞. 全能干细胞 多能干细胞 专能干细胞 胚胎干细胞的生物学特征 胚胎干细胞的培养建系 胚胎干细胞的鉴定 胚胎干细胞的应用前景与面临的难题 来源与特点 定义 胚胎干细胞：将早期胚胎的内细胞团细胞分离出 来，在体外特定的条件下进行培 养，内细胞团细胞将保持其未分化 性，并继续进行分裂，形成多潜能 的细胞系。这样经过培养的内细胞 团细胞称为胚胎干细胞。 定义 来 源 内细胞团细胞(ES细胞) 原始生殖细胞(EG细胞) 来源 特点：未分化、多分化潜能、无限增殖三大特点。 生殖克隆（治疗性克隆）：体细胞核转移 胚胎干细胞的生物学特征 形态结构与核型 细胞分化 细胞分化的调控 形态结构与核型 干细胞的形态：圆形/椭圆形，个小，核质比相对较大。 体外培养:集落状生长,细胞克隆呈岛状或巢状,细胞克隆与周围细胞界限明显. 核型:XY、XX 集落状生长 巢状、岛状克隆 克隆中央细胞 克隆边围细胞 胚胎干细胞的分化特征 体外易分化 饲养层细胞共培养 发育的全能性 分化潜能： 多能性干细胞 专能性干细胞 全能性干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞（γ 射线、丝裂霉素c处理） 发育的全能性表现在: 可以形成嵌合体，参与嵌合体各个器官的发育 可以形成包括三个胚层的畸胎瘤 可以形成包括三个胚层组织的类胚体 可以直系分化某特定种系细胞 Injection of ES cells into Blastocysts 细胞分化的调控 内源性调控： 细胞内蛋白对胚胎干细胞分裂的调控 转录因子的调控 外源性调控： 分泌因子 膜蛋白介导的细胞间的相互作用 整合素与细胞外基质 胚胎干细胞的培养建系过程 胚胎干细胞的分离(即:分离内细胞团细胞) 方法: 免疫学方法 免疫外科学方法 组织培养法 显微外科方法 胚胎干细胞的分离培养 细胞分化抑制物的选择和饲养层的制备 饲养层细胞 分化抑制因子 分化抑制培养基 早期胚胎与原始生殖细胞的培养 培养条件： (1) 特殊的培养液：DMEM培养液+胎牛血清+非必须氨基酸+β-巯基乙醇。 (2) 饲养细胞 (3) 分化抑制因子:LIF 饲养细胞层：由STO成纤维细胞或原始胚胎成 纤维细胞培养后, 经γ 射线照射 或经丝裂霉素C处理失去了有丝 分裂活性,接种于培养皿中,形成 的单细胞层.用于培养胚胎干细 胞,可以使其保持未分化性。 胚胎干细胞的鉴定 形态学检测:圆形/椭圆形，岛状或巢状生长 碱性磷酸酶活性检测:活性高,分化细胞中活性低 体内分化实验:产生具三个胚层的畸胎瘤 体外分化实验:形成简单囊状胚体或类胚体 核型分析法:二倍体 OCT活性检测: OCT4(早期胚胎细胞表达的转录因子)阳性; SSEA(特异性胚胎抗原)3、４阳性 胚胎干细胞的应用前景与面临的难题 胚胎干细胞的应用前景　　 动物克隆及人类治疗性克隆（基因型、表现型相同）　　　　　　　　　 在转基因动物中的应用（外源基因载体） 制备嵌合体动物　 治疗性克隆：是指利用核移植技术与转基因和胚胎干细胞等生物技术结合，体外培养所需的细胞、组织或器官，以替换或修补患者损伤或患病的细胞、组织及器官的过程。 胚胎干细胞研究面临的问题及解决办法 用于干细胞研究的胚胎来源困难 如何保持胚胎干细胞的全能性，并控制向特别类型细胞转化？ 如何分离、纯化干细胞？ 移植后的细胞是否有致瘤性？ 干细胞在体外发育成完整的器官尚难以做到。 伦理问题