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国家开放大学电大本科《农业微生物学》形考任务4试题及答案 形考任务4 1实验一 细菌的革兰氏染色 一、目的与要求 了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染色的主要操作步骤，学会革兰氏染色的方法。 实验原理 革兰氏染色是细菌学中一个重要的鉴别染色，按照细菌对这种染色反应的不同，可以把细菌区分为二大类群，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌能保留初染染色剂（结晶紫）于细胞中，不受脱色剂（酒精）的影响，而被染成紫色或深蓝色。革兰氏阴性菌不能保留初染染色剂于细胞中，因脱色剂的作用而洗出结晶紫，然后被另一种染色剂（番红或藏花红）染成红色。也有一些菌种革兰氏染色是可变的。 实验材料 菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。 染色液：草酸铵结晶紫染液、路戈氏碘液、95%酒精、番红染液。 器皿及材料：洁净载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、酒精灯、接种环、镊子、无菌水、洗瓶、染色盘、载玻片架、记号笔、75%消毒酒精瓶、废玻片缸、火柴等。 仪器：显微镜。 四、实验方法与步骤 1．涂片固定如简单染色。 2．初染：在涂片处加1滴草酸铵结晶紫染液，染色1分钟，水洗。 3．媒染：用路戈氏碘液染色1分钟，水洗。 4．脱色：将载玻片略倾斜，滴加95%酒精脱色，约30～60秒，洗至流下的脱色酒精刚好无色为止，立即水洗。 5．复染：用番红染色液染色1～2分钟，水洗后干燥。 6．镜检。 五、实验结果 将显微镜下观察到的2个菌种的革兰氏染色结果填于下表中，并描述菌体的颜色、形态、排列方式。 菌种名称 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌 菌体形态图 菌体颜色 红色 紫色 菌体形态 两端着色钝圆棒状 菌体排列方式 单独存在或成双，不是长链状 链状排列 结论(G+或G-) G- G+ 形考任务5 实验十四：土壤微生物的分离和计数 一、目的与要求 学习用稀释平板法从土壤中分离微生物，掌握平板计数方法，计算土壤中微生物的数量。 二、实验原理 自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，生活在土壤中的微生物无论是数量和种类都非常丰富的，因此从土壤中分离微生物是人类获得微生物资源的重要途径。土壤中的微生物种类、数量与土壤的肥力、类型等有关。一般情况下，肥沃的土壤中微生物种类和数量多，贫瘠的土壤中微生物种类和数量少。从土壤中分离微生物时，应根据被分离微生物特点，设计分离方法。实验采用稀释平板法，从土壤中分离微生物，采用该方法分离土壤微生物的同时，还可以计算出土壤中微生物的数量。 三、实验材料 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基、高氏合成一号琼脂培养基。 器皿及材料：菜园土（经2mm分样筛过筛）、90mL无菌水瓶（内装玻璃珠约20粒）、9mL无菌水试管、1mL无菌吸管、无菌培养皿、乳酸溶液，链霉素溶液（20mg/mL）、1%重铬酸钾溶液、天平、试管架、无菌称量纸、牛角匙、酒精灯、玻璃刮铲、记号笔、火柴等。 四、实验方法与步骤 1．土壤稀释液的制备：称取10克菜园土置于90mL无菌水瓶中，振荡30分钟，使微生物细胞充分分散，即成10-1稀释液；静止片刻后（约20～30秒钟），取101稀释液1mL置于9mL无菌水试管中，得10-2稀释液，摇匀；按同样方法将土壤浸液稀释到10-6～10-8稀释度，每次更换1支无菌吸管（图9-4）。 2．平板接种培养 ①细菌平板培养：采用基内接种法，将无菌培养皿编上10-5、10-6和10-7三个稀释度号码，每个号码设3个重复，共9皿。用1mL无菌吸管按无菌操作要求吸取107稀释液各1毫升放入编号10-7的3个培养皿中，同法吸取106稀释液各1mL放入编号10-6的3个培养皿中，再吸取10-5稀释液各1mL放入编号10-5的3个培养皿中（由低浓度向高浓度吸取菌液时，即由高稀释度向低稀释度吸取菌液时，可不必更换吸管）。然后在9个培养皿中以无菌操作方法分别倒入已融化并冷却至45℃～50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，轻轻转动培养皿使菌液与培养基混合均匀。待冷凝后将培养皿翻转培养在28℃～30℃的温箱中，24～48小时后观察生长情况。计算菌落数量，计数时每皿菌落20～100个为宜。 ②真菌平板培养：方法同细菌，取土壤稀释液10-4、10-3和10-2分别接种，再倒入已熔化且冷却到45℃～50℃的马铃薯琼脂培养基（培养基熔化后加乳酸调节pH至5.5～6.0左右，100mL培养大约加1滴乳酸，同时再加入20mg/mL的链霉素溶液0.1mL，凝固后，将培养皿翻转，置于25℃～28℃培养3～5天。检查计数，每皿菌落以20～60个为宜。 ③放线菌平板培养：采用表面接种法，按无菌操作要求，将已熔化且冷却到45℃～50℃的高氏一号琼脂培养基（当培养基