医学细胞生物学实验14 细胞凋亡检测.pptVIP

医学细胞生物学实验14 细胞凋亡检测.ppt

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实验十四 细胞凋亡检测 细胞凋亡和细胞坏死 凋亡和坏死的细胞形态变化特征 凋亡:基因控制的细胞主动死亡的过程。细胞膜向外突起、起泡,细胞体积缩小,染色质浓缩,然后断裂成碎片,变成数个大小不等的由膜包裹的凋亡小体,最后凋亡小体被邻近细胞吞噬,无炎症现象。 坏死:细胞受到激烈的物理、化学刺激或严重的病理性刺激后,引起的细胞损伤和死亡。特征:胞膜通透性增高,使细胞肿胀,细胞器变形或肿大,细胞核破碎,最后细胞溶解破裂,溶酶体泄漏,引起炎症反应。 实验内容 材料:单细胞悬液(每组2ml) 处理方法:紫外线照射 5 分钟 检测(每人): 1、台盼兰染色:判断细胞死活 细胞液与台盼兰混匀,加盖玻片,立即镜检 2、Giemsa染色:判断细胞是否出现凋亡 细胞液与Giemsa混匀,加盖玻片,5分钟后镜检 3、吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色: 荧光显微镜下观察 正常细胞:绿色荧光;早期凋亡细胞:黄色荧光 晚期凋亡/坏死细胞:橙红色荧光 细胞凋亡检测(荧光显微镜) 取25ul的细胞悬液 + 1ul AO/EB混合液 * 染色质浓缩 细胞核破裂 形成凋亡小体 细胞膜向外突起 细胞核断裂成碎片 染色质浓缩,形成多种形态 由膜包裹的凋亡小体 新月状 八字形 花瓣状 黑洞样 眼球状 环状 DNA ladder 在载玻片上混匀,加盖玻片,荧光显微镜观察 计数100个细胞,计算凋亡率 * * *

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