色谱法概论1教学教材.ppt

二、色谱流出曲线（色谱图） 所谓色谱流出曲线，即流出液中的组分浓度随洗脱体积或洗脱时间的变化曲线，也称色谱图。 获得： （1）间隔一定时间或一定流出体积，测定流出液中组分的浓度，以浓度为纵坐标，时间或体积为横坐标，描点作图即得 （2）在柱子出口处设置检测器，如测定流出液的吸光度，换算成浓度（信号值），连续记录流出液的吸光度随时间的变化，即得色谱图（仪器化）。 流出曲线是柱内组分分离结果的反映，是研究色谱分离过程机理的依据，也是定性、定量的依据。 色谱流出曲线的意义： 色谱峰数=样品中单组分的最少个数； 色谱保留值——定性依据； 色谱峰高或面积——定量依据； 色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标； 色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。 三、几个重要的色谱参数及概念 （1）基线：在实验条件下，当只有流动相通过（检测器）色谱柱时，得到的流出曲线，通常为一水平直线称为基线。 （2）峰高（h）：从色谱峰到基线的垂直距离。 （3）峰宽（Wb）：从色谱峰的捌点作切线，与基线两交点之间的距离，也称基线宽度。 （4）半峰宽（W1/2）：色谱峰高一半处峰的宽度（不是峰宽的一半） （5）标准偏差（σ）： 色谱峰两侧两捌点之间 的距离的一半，也即 0.607h处的峰宽的一半。 Wｂ、σ、W1/2色谱意义： 它们反映被分离的组分分子在柱内迁移时的离散程度,Wｂ、σ、W1/2越小，表示分子相对集中； Wｂ、σ、W1/2 越大,表示分子相对分散。 （6）拖尾因子T: 0.95～1.05，色谱峰为对称峰 （7）保留时间(tR)（Retention time） 流动相携带组分通过柱子所需要的时间，即从进样洗脱到流出液中组分的浓度出现极大值点所需要的时间。 （8）死时间(t0) 不被固定相所滞留的组分通过色谱柱所用的时间，即不被固定相所滞留的组分的保留时间，即死时间。 在时间上，它等于流动相分子通过色谱柱所需的时间，当某组分不被固定相所滞留时，即完全随流动相移动，其移动速度完全等于流动相的速度，所以t0=tm。 （9）调整保留时间(tR’)：扣除死时间后的组分实际被固定相所保留的时间,即tR’= tR-t0 = tR-tm 意义： 组分随流动相移动的时间都是相同的，都是死时间。它与固定相、组分的性质均无关，只与流动相的流动速度有关，对分离不起作用。 tR’即为组分在固定相中出现的（保留的）时间，即组分被固定相所滞留的时间，与组分和固定相之间的作用力有关。 tR’是与组分和固定相性质有关的，更能从本质上反映出不同组分的差异，反映色谱过程的实质。 （10）保留体积（VR） 从进样开始到组分洗脱出柱所用的洗脱剂的体积（与流速无关）。 （11）死体积（V0、Vm） 不被固定相滞留的组分的保留体积 (或不被固定相滞留的组分流出色谱柱所需要的洗脱剂的体积)。 这个体积应等于柱内流动相的体积，即流动相的量，也即固定相之间的空隙。 （12）调整保留体积（VR’） VR’=VR - V0=VR - VM （13）相对保留值（α2,1，γ2,1） 以一已知物的调整保留值为基准，其它各组分的调整保留值与之比值即为α2,1，γ2,1。 α2,1=tR 2’/tR 1’=VR 2’/VR 1’=γ2,1 须注意： ① 规定对于α2,1须有tR 2’>tR1’ VR 2’>VR 1’ 即α2,1>1。 ② 对于γ2,1, “1”表示基准物质, “2”表示待测物质,用于定性分析。 ③ 相对保留值只与固定相、组分及流动相的性质有关,与柱长、流速等无关。 ④ 若两组分能分离,则α2,1>1 ⑤ α2,1又称为选择性因子 （14）柱长(L) 柱中填充固定相部分的长度。 要点： ① 需掌握tR、VR、t0 (tm)、tR’、VR’的色谱学意义及定义。 ② 这些参数之间的关系，它们能说明什么问题? 思考题： 若一组分的分子通过色谱柱需tR时间，流动相分子通过色谱柱需用t0时间，问：该组分分子在色谱柱内有多少时间停留在固定相上，有多少时间流动相中？ 色谱法基本原理 p218 色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离，组分要达到完全分离，两峰间的距离必须足够远，两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的热力学性质有关。 但是两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠，还是不能分开。这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。 因此，要从热力学和动力学两方面来研究色谱行为。 一、色谱法分离过程的动力学观点 所谓动力学观点是以分子的运动速度来考虑问题，研究的是状态随时间的变化率。 1、组分在色谱柱内的移动速度（绝对速度） 被分离的组分以一定的速度随流动相迁移。当考虑一个分子