14 1血清学实验技术 课件.ppt

对流免疫电泳 ① Ag 为阳性；② Ag 为弱阳性；③ Ag 为强阳性；④ Ag 为强阳性 三、免疫标记技术 抗原与抗体结合了，但复合物小，不能通过凝集或沉淀 用肉眼观察到。 定义： 将抗原 - 抗体反应与标记技术相结合，用 放射性同位素、酶或 荧光素 标记的已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未 知的抗原或抗体。 检测标记物的存在，间接反映抗原抗体发生了结合。 抗原抗体反应的特异性 标记分子的敏感性 分类： 放射免疫测定法： 131I ， 32P 免疫荧光技术： FITC ， PE 免疫酶测定法： HRP ， AP 免疫酶测定法 ( E nzyme I mmuno A ssay,EIA) ? 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。 ? 辣根过氧化物酶 (HRP) ，碱性磷酸酶 (AP) ? 特点： ? 高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性 ? 高灵敏度：酶催化底物显色的高效性， pg 水平微量检测 ? 定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值 ? 分类： ? 酶联免疫吸附试验：可溶性抗原或抗体 ? 酶免疫组化法： 组织中或细胞表面的抗原。 酶联免疫吸附试验 ( E nzyme- L inked I mmuno S orbent A ssay,ELISA) 用酶标记抗原或抗体检测液体（血液、细胞液） 中未知抗体或抗原的方法。 1. 定义 2. 分类 ? 间接法（ Indirect ELISA ）： ? 将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗 ? 检测液相中未知抗体 ? 双抗体夹心法（ Sandwich ELISA) ： ? 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗 ? 检测液相中的可溶性抗原 ? 竞争法（ Competitive ELISA) ： ? 将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原 或抗体 ? 检测液相中的可溶性抗原或抗体 酶联免疫吸附试验 ( E nzyme- L inked I mmuno S orbent A ssay,ELISA) 3. 原理 （以间接性 ELISA 为例） ： 显色 四、补体结合反应 补体结合反应： 是指在 补体 的参与下，以绵羊红细胞 （ SRBC ）和溶血素（抗 SRBC 的抗体）作为 指 示系统 的 抗原抗体反应 。 补反中包括 两个系统 五种成分： ? 待检系统：已知 Ag 或 Ab 、待检 Ab 或 Ag ? 补体 : 仅供一组 Ag-Ab 系统反应的定量补 体。 ? 指示系统：绵羊红细胞和溶血素。 原理： 待测系统 抗原 + 未知血清 1 2 补体 1 2 Step 1 抗原抗体复合物的形成 Step 2 补体的结合和耗竭 指示系统 SRBC+ 抗 SRBC 抗体 Step 3 SRBC 的裂解 1 2 1 ： No Ab ； 2 ： Ab Ag 待测血清 Ab 阳性 No Ab 阴性 Ag Ag Ag 第二十四章 血清学试验 第一节 血清学反应概论 概念：在体外进行的抗原抗体反应，一般采用血清进行，称 为血清学反应 Ag 血清 (Ab) Ag-Ab 复合物 pH 7.0 37 0 C 一、血清学反应的一般规律 二、血清抗体的制备原则 三、影响血清学反应的因素 四、血清学反应的应用 一、血清学反应的一般规律 （一） 抗原与抗体结合的胶体形状变化 抗体在溶液中以胶体状态存在 + + + + + + - - - - - - - - - - - - - - + + + + + + ? 范德华力 抗原抗体互补空间关系有助于该力发挥作用。 ? 静电引力 氨基与羧基 ? 氢键结合力 大于范德华力 ? 疏水作用 抗原抗体分子上非极性氨基酸，提供的作用 力最大 ( 二 ) 抗原抗体作用的结合力 ? 比例适合才出现最强的反应。沉淀反应 ? 抗原抗体反应的等价带 : 最适比时，抗原抗体结合充分，沉淀物形 成快而多，上清中存在少量游离。 ? 带现象：如抗原或抗体过剩，其结合价不 能相互饱和，则抗原与抗体仅能形成小分 子的复合物，不出现肉眼可见的反应。 （三）抗原