ELISA基础知识和注意事项PPT参考幻灯片.pptVIP

间接法的假阳性 麻疹IgG 麻疹 抗原 麻疹IgM 抗人酶标 IgM抗体 类风湿因子 阳性结果 假 阳 性 结 果 * 间接法的假阴性 麻疹IgG 麻疹 抗原 麻疹IgM 酶标抗人 IgM抗体 阳性结果 假阴性结果 * ELISA的有关名词概念 质控血清：质控血清是为了对实验结果进行控制而配制的血清。质控血清可以是定值也可以是不定值，可以购置也可以自配。自己配制时要注意选用无脂血的血清或血浆，不能用试剂盒内的阳性对照。若用稀释的血清作为质控血清，应考虑稀释基质成分对结果的影响。因质控血清与临床标本不一致，应该注意对结果的分析，应该注意质控血清只能用于质控活动，不可用于标定仪器或评价方法。用于室内质控的质控血清一般选取CUTOFF值2-3倍的质控品。 * 室内质控：实验室内部使用控制实验结果可靠性的一种质量控制。 室间质评：用于考核各个实验室结果可靠性的一种考核，可分为国家级和地方级的室间质评。可以理解为 “各个实验室的质量评比”。 * 临界值（CUTOFF值）：临界值是判断阴阳性或有临床意义水平的数值，临界值的确定是测定大量数据后应用统计学方法确定的。许多试剂都会给出临界值或临界值的计算方法。 本底：就是底色。如ELISA HBsAg，阳性显色，阴性不显色，本底就是整个阴性显色的情况。ELISA 抗–HBcAb，阳性不显色，阴性显色，本底就是整个阳性显色的情况。 * 灵敏度：能检测到的分析物的最小量，表示检测下限的能力。 相对灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100% 测定方法及表示方法：灵敏度标准品、质控血清、阳性标本稀释终点、血清盘（pannel）及临床标本阳性率。 * 特异性： 真阴性标本的检出能力。 相对特异性=真阴性/（真阴性+假阳性）×100% 测定及表示方法：质控血清、血清盘、临床标本阴性率。 * Elisa结果的影响因素 试剂盒的选择 标本 加样与稀释 温育 洗版 显色 质控 * 试剂盒的选择 同行的试剂使用情况 上级部门对试剂实际使用的综合评价 使用临界值质控血清进行实际检测比较,选择林敏度和准确度高、特异性强试剂盒 * 标本 应注意避免溶血 在5 天内测定的血清标本可放置于4℃、超过一周测定的需－20℃保存 尽量避免反复冻融（少量分装） * 加样和稀释 加样本的准确性（个人因素和实验条件） 尽可能排除主关因素（尽可能用加样枪，避免直接使用滴瓶） 各种试剂盒标本的稀释使用，严格按照说明是操作 * 温育 温度 水浴箱 发硬板应漂浮于水上或水面应高于反应板 * 洗版 手洗 洗板机 （微孔液体残留2ul、浸泡时间45s） * 显色 通常是A、B两种液体，不稳定，又颜色应立即丢弃 先加A后加B，显色时间严格按说明书进行 终止后15内比色 * 质控 室内质控血清 即刻法 * ELISA试剂的常见问题原因及其解决 显色浅，灵敏度低 假阳性多，本底高甚至花板 重复性不好 白板 * 显色浅 灵敏度低 序号 原因 解决方法 1 试剂盒运输时间过长，受高温天气影响，酶的活性降低。 试剂运输过程加放足够冰袋并尽可能缩短运输时间。 2 试剂盒（包括未用完的板条及其他组分）保藏条件不正确。 试剂盒内所有组分都应当在4℃冷藏，未使用完的板条要密封保存。 3 试剂盒使用时已超出有效期。 过期试剂盒不可以使用。 4 温育时间不够。 严格按照说明书操作。 5 恒温箱温度达不到37℃。 注意控制恒温箱温度，尽可能让其稳定在37±0.5℃。尽量避免频繁开关恒温箱门。 经常注意水箱中合适的水位。 在保证水不没过酶标板的前提下，使水位尽量高，以保证反应温度。 * 6 加样量不足；移液时抽吸排放过快，有气泡、或吸头内残留液体过多。 经常校正移液器。注意吸头要与移液器吻合。移液不宜过快，排放要完全。 7 显色剂加量不足，或加入顺序颠倒。 按照说明书要求，先加入A液、后加入B液，并保证加入量。 8 样品用NaN3防腐，影响了酶的活性。 不可以使用NaN3防腐。 9 试剂、样品使用前未平衡至室温。 试剂、样品从低温保藏条件中拿出来后，要先平衡