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Trizol法提取细胞总蛋白 精品文档 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 精品文档 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 Trizol法提取细胞总蛋白 提取细胞总RNA吸去上清后，按0.3ml乙醇/1ml Trizol加入中间层和下层有机相，混匀，室温静置3 min； 4℃，2000 rpm，离心5 min，取上清转移至新的EP管中（约0.8 ml）； 加入1．5 ml异丙醇沉淀蛋白质，室温放置10 min； 4℃，12000 rpm，离心10 min，弃上清； 用2 ml含有0．3 mol／L盐酸胍的95％乙醇洗涤蛋白质沉淀，室温放置20 min，4℃，7500 rpm离心5 min；重复洗涤三次； 无水乙醇洗涤一次沉淀，室温放置20 min； 4℃，7500 rpm，离心5 min； 真空干燥沉淀，加入适量l％SDS，55℃振荡溶解3 h； 不溶物再以4℃，10000 rpm离心10 min，取上清即为细胞总蛋白溶液，分装后于-80℃保存待用。 全程大约需配制试剂 0.3M盐酸胍95%乙醇溶液：2.866 g盐酸胍，加100 ml 95%乙醇。 1%SDS溶液：1g SDS 溶解于100 ml去离子水。