唾液淀粉酶最适pH值的测定小论文.docVIP

唾液淀粉酶最适pH的测定 作者 地址 摘要： 目的：本实验的目的是掌握测量pH对酶活力影响的基本原理和方法，了解pH对酶活力的影响。 方法：将唾液淀粉酶置于不同pH环境中可改变其活性，利用唾液淀粉酶能够催化淀粉的水解，剩余淀粉与碘络合变成蓝色。单位时间内，被水解的淀粉量可以反映淀粉酶的活性，通过测定吸光度判断淀粉分解程度，而判断酶的活性，吸光度低的对应pH即为酶的最适pH； 结果：唾液淀粉酶的最适pH的参考值为6.8。 关键词：唾液淀粉酶、吸光度、缓冲液、 前言：新陈代谢是生命活动的基础，生物体内一切化学反应，几乎都是在酶的催化作用下进行的，只要有生命的地方，就有酶在起作用，生命不能离开酶而存在。酶的独特的催化功能，使它在工、农业和医疗卫生等领域具有重大实用意义。酶的高效性和专一性，及其不需要在高温、强酸、强碱条件下作用的特点是普遍化学催化反应所无法比拟的。酶的研究成果给催化理论、催化剂的设计、药物的设计和作用原理的了解、疾病的诊断和治疗以及遗传和变异等方面提供了理论的依据和新的概念。酶量与酶活性的改变都会引起代谢的异常乃至生命活动的停止。而酶的活性往往取决于温度、pH等，对于人体而言，一方面，人体内环境的变化会导致体内酶活性的改变，影响新陈代谢；另一方面，体内酶活性的改变恰恰可能表明人体内环境出现紊乱。临床上可用酶活性的检测来辅助诊断疾病。 正文： 实验材料: 仪器：试管、烧杯、吸量管、移液枪、洗耳球、恒温水浴箱、分光光度计、坐标纸等。 试剂：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、0.2mol/L磷酸二氢溶液、蒸馏水、唾液淀粉酶液、碘液、0.5g/L淀粉溶液等。 二、实验原理：本实验在其他条件相同，而pH不同的条件下，利用淀粉酶能够催化淀粉的水解，剩余淀粉与碘络合变为蓝色，而酶活性越高，剩余淀粉量越少，呈色越浅。此为定性观察。 然后进一步利用Lambert-Beer定律判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，溶液浓度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量剩余淀粉量与碘反应产生的蓝色溶液在660nm处的吸光度值，可以了解pH对酶促反应的影响，所测得吸光度最小的溶液其pH值即为唾液淀粉酶的最适pH。 三、实验步骤 缓冲溶液的配制 以磷酸氢二钠—磷酸二氢钠作为缓冲液（pH6.0—7.6），用0.2mol/L Na2HPO3溶液和0.2mol/L NaH2PO3溶液混合，再加蒸馏水稀释到10ml。如下图：取9支大试管进行编号1-9，分别按下表加入试剂。 编号 pH 0.2mol/L磷酸氢二钠(ml) 0.2mol/L磷酸二氢钠(ml) 1 6.0 0.615 4.385 2 6.2 0.925 4.075 3 6.4 1.325 3.675 4 6.6 1.875 3.125 5 6.8 2.450 2.550 6 7.0 3.050 1.950 7 7.2 3.600 1.400 8 7.4 4.050 0.950 9 7.6 4.350 0.650 2.唾液淀粉酶液制取 漱口1～2次，然后含一大口水，期间做咀嚼运动， 1min后收集于烧杯中。 3.淀粉用量的确定 表2 实验组和空白对照组设置表 用量（ml） 实验组 1 2 3 空白组 pH=7的缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L淀粉 0.1 0.2 0.3 — 唾液（稀释10倍） 0.1 0.1 0.1 0.1 H2O 5.9 5.8 5.7 6.0 混匀，37℃水浴5 min，然后向每管加2滴碘液。 混匀，观察现象,哪组淀粉溶液颜色反应最浅，则选择该管做下一步实验。 结果：经观察，确定实验组1（淀粉用量为0.1）时颜色最浅，即选择用量为0.1ml的0.5g/L淀粉溶液 唾液稀释倍数的选取 表3 不同稀释倍数的酶液 用量（ml） 稀释倍数 5 10 15 20 25 30 酶液 1.0 0.5 0.4 0.25 0.2 0.2 蒸馏水 4.0 4.5 5.6 4.75 4.8 5.8 表4 最适稀释倍数的确定 用量(ml) 2.5g/L淀粉溶液 0.1 稀释酶液 0.1 蒸馏水 6.0 混匀，37摄氏度