微生物实验报告：水中细菌总数和大肠菌群的检测PDF打印版.pdfVIP

学 海 无 涯 实验六 水中细菌总数和大肠菌群的检测 摘 要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情 况。初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。对该实验点的水 源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。 关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMB 培养 前言 各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正 相关，因而是评价水质污染程度的重要指标之一。细菌总数是指 1mL 水样中所含细菌菌落 的总数[cfu/g(mL)] ，可用稀释平板计数法检测。水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被 粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。 特征：G-无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h 内能发酵乳糖产酸、产气。 多管发酵法 初发酵：适当稀释样品，乳糖发酵培养，产酸产气； 分离培养：伊红美蓝（EMB ）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落； 复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。 材料和方法 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定 牛肉膏5g，蛋白胨10g， NaCl 5.0 g ，琼脂8g， 蒸馏水1000ml ； pH 7.0 乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵 1×：蛋白胨 20g 、牛胆盐 5g、乳糖 10g、0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL （调pH 值后加）、 水 1000mL、pH 7.2 －7.4 三倍浓缩液（3 ×）：除水以外，其余成分取三倍用量 分装：1×的培养基分装9ml/管， 3 ×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。 灭菌条件：115℃ ，15min。 EMB 培养基：用于大肠菌群菌落鉴定 脱水培养基，按说明书操作，水用量为90% 。 水源：紫竹院河水 仪器： 高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环 、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒 精灯、显微镜等。 试剂 ： 牛肉膏，蛋白胨，NaCl ，琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚 紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂 具体实验步骤： 1），相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。 2 ），按照上述的配料，无菌操作配置培养基。 3 ），细菌总数的测定：取上述样品水，一次稀释10-1,10-2,10-3,3 个浓度。对于每个浓度，取 1ml 稀释液加入冷却好的牛肉膏蛋白胨培养基中，立即混匀，每个浓度重复一次。将平皿倒 置培养在37℃的温箱24h ，计算平皿的细菌总数。 0 -1 -2 4 ），大肠菌群的测定：将样品水稀释成10 ,10 ,10 ,3 个梯度。 实验结果与数据分析 1，细菌菌落总数 稀释浓度及菌落数 平板菌落 报告方式 菌落总数 组别 10-1 10-2 10-3 状况 选取 （cfug , 1 学 海 无 涯 cfu/ml 1 12 0 0 最低稀释 度下菌落 2 4 0 0 数 8.0 ×10 均小于30 × 平均 8 0 0