2 淋巴细胞分离实验和细胞计数.pptVIP

外周血单个核细胞的分离 外周血单个核细胞的分离 原理 试剂和仪器 实验步骤 注意事项 原 理 外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 原 理 外周血 红细胞 粒细胞 单个核细胞 血小板 淋巴细胞 单核细胞 1.093 1.030~1.035 1.075~1.090 Ficoll：1.077±0.001 (PBMC) 1.092 2000rpm, 20℃ , 30min PBMC 红细胞粒细胞 Ficoll 稀释外周血 Ficoll 稀释的血浆、血小板 实验步骤 1.采血，稀释 （外周血：稀释液=1：2） 2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血 （Ficoll：稀释血=1：2） 实验步骤 3.20℃，2000r/min，离心20min 4.沿管壁周缘轻轻吸取PBMC层移入另一试管中 实验步骤 5.加足量稀释液充分洗涤，1500 r/min离心10min ，弃上清 6.重复洗涤一次，1000r/min离心10min，弃上清，洗涤两次。 7.适量的培养基重悬细胞 ，计数 试剂和仪器 淋巴细胞分层液（Ficoll，低温避光保存）， GT-T