生物催化与生物转化III 课件.ppt

第三节 加成和消去反应 ? 裂合酶还可催化小分子化合物如水或氨不对称 加成到 C ＝ C 双键，以及氢氰酸加成到 C ＝ O 键 上。 ? 根据底物的结构类型，反应过程中潜手性底物 可以产生一个或两个手性中心。催化这类反应 的酶底物专一性很高，只接受天然底物或与天 然底物结构非常类似的化合物为底物。 ? 一、氰醇反应 ? 醇腈酶 (oxynitrilase) 催化氢氰酸不对称 加成到醛或酮分子的羰基上，形成手性氰 醇，这种反应早在 1908 年就被使用。 ? 手性氰醇能转化为拟除虫菊酯杀虫剂的醇 基部分，如溴氰菊酯、氯氟胺氰戊菊酯。 ? 醇腈酶具有很高的立体选择性， (R)- 或 (S)- 醇腈酶能立体选择地催化潜手性底物生成 (R)- 或 (S)- 氰醇，见图 9-37 、表 9-6 、表 9- 7 。 ? (R)- 或 (S)- 醇腈酶能从不同来源的植物中分 离制备。 转移和裂合反应 ? 在六大类酶中，氧化还原酶和水解酶在生物催 化的手性合成中应用最多，约占生物催化用酶 的 90 ％。然而其他四大类酶 —— 转移酶、裂合 酶、异构酶和连接酶在生物催化中也有着重要 的应用，它们能催化 C — C 、 C — N 和 C — O 以 及 C ＝ C 、 C ＝ O 等化学键的生成或裂解反应。 ? 随着化学与生物学的发展和学科间交叉融合， 这些酶的研究和应用将会逐年增加，并发挥越 来越重要的作用。 第一节转移反应 ? 转移酶是一类常见生物催化剂，它所催 化的转移反应如式 (9.1) 所示： ? 这类酶催化的底物有氨基酸、酮酸、核苷酸和 糖等化合物，其中糖基转移酶已被用于制备新 型糖。 一、氨基转移酶 ? 氨基转移酶以磷酸吡哆醛 (PLP) 为辅酶催化下 列反应，见式 (9.2) 。反应中氨基酸将分子中 氨基转移给 α - 酮酸，生成新的氨基酸和酮酸。 ? 生物催化合成中常用的氨基转移酶有分支 链氨基转移酶 (BCAT) 、天冬氨酸氨基转移 酶 (AAT) 、酪氨酸氨基转移酶 (TAT) 等。 ? 氨基转移酶种类多、分布广，它们能催 化 L- 氨基酸的生物合成。 ? 目前研究较多的 D- 氨基酸转移酶 (DAT) 能催化 D- 氨基酸的合成。 ? 采用基因工程法可在工程菌内转入乙酰乳 酸合成酶 (ALS) 基因，由该基因表达产生的 乙酰乳酸合成酶能催化两分子丙酮酸缩合 为乙酰乳酸 (3) ，后者再经脱羧反应转变为 代谢惰性的乙偶姻 (4) 。这种方法已被用于 生产 I — 氨基酸 (5) 和 D-2- 氨基丁酸 (6) ，见 图 9 — 1 。 合成的前体。 例如 : ? L- 叔亮氨酸 (7) 可用于合成 HIV 蛋白酶抑 制剂 ? L- 高苯丙氨酸 (8) 可用于合成 ACE 酶抑制 剂，用于治疗高血压 ? D- 苯丙氨酸 (10) 用于制备凝血酶抑制剂， 防止血栓形成，见图 9-2 。 ? 二、糖基转移酶 ? 寡糖具有重要的生物学功能，在生命活动中涉 及细胞运动、细胞间相互作用、肿瘤发生与转移 和病原体与细胞表面相互作用等 生物学过程。 ? 寡糖在生物体内含量甚微，分离纯化困难。化 学法合成寡糖是一复杂的过程，合成时需要大 量的保护和脱保护反应，而且产率低。 ? 由于酶具有区域选择性和立体选择性，采用生 物催化法不需要过多的保护和脱保护步骤，生 物催化法合成寡糖具有非常诱人的前景。 1 ．糖基转移酶的催化特性 糖基转移酶负责体内寡糖合成，合成过程包括活 化、转移和修饰三个步骤。 ? 单糖在被转移之前必须先磷酸化，产生 1- 磷酸糖 ? 1- 磷酸糖在核苷转移酶作用下与核苷三磷酸 ( 一般 是 UTP) 反应生成核苷二磷酸糖 (NDE- 糖 ) ? 最后糖基转移酶将 NDP- 糖中的糖基转移到“受 体” ( 单糖、寡糖、蛋白质和脂分子 ) 上， NDP 从 糖基上释放游离出来，完成糖基转移过程 ? Β - 半乳糖基转移酶是研究得最多的一种 糖基转移酶，该酶催化半乳糖 (Gal) 从糖 供体 UDP-Gal 中转移到糖受体中形成新 的糖苷键。 ? 其他糖基转移酶虽然研究得相对较少， 但它们同样能催化糖基转移到多种糖受 体上。 ? 2 ．糖苷合成 ? 糖苷酶水解的逆反应可用于糖苷合成， 利用游离单糖作为底物直接进行糖苷合成 反应称为直接糖基化， ? 糖苷酶与糖基转移酶相比，糖苷酶更容易获 取。 ? 糖苷酶催化反应的缺点是产率低、产物常为 混合物。 ? 糖苷酶催化转糖基反