2019年免疫共沉淀技术.pptVIP

威斯腾生物技术中心 免疫共沉淀技术 ? 定义及原理 ? 操作流程 ? 优点和不足 ? 注意事项 ? 应用及实例 ? 展望 定义及原理 ? 免疫共沉淀定义 免疫共沉淀（ Co-Immunoprecipitation,CO-IP) 也称免 疫共吸附或免疫下拉技术，能够从细胞裂解物中特异性的 分离并富集目标蛋白。 CO-IP 是通过 抗原抗体之间的专一性 作用为基础来研究 蛋白质相互作用 的经典方法。也是确定两种蛋白质在完整 细胞内生理性相互作用的有效方法。 ? 基本原理 在细胞裂解液中加入抗目的蛋白的抗体，孵育后 再加入与抗体特异结合的偶联于 sepharose beads 上的 proteinA/G, 与细胞中的抗体结合，形 成一种复合物：目的蛋白 / 目的蛋白 - 抗目的蛋白 抗体 -proteinA/G , 经过变性凝胶电泳，复合物分 开。 最后通过免疫印迹或质谱检测目的蛋白。 原 理 流 程 示 意 图 操作流程 ? 免疫共沉淀实验流程 (1) 蛋白样品准备 （如果为细胞样品需先裂解） (2) 抗原抗体结合反应 ( 3)Protein A/G 与抗原抗体复合物结合