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Elisa Kit 使用方法 检测原理 : 本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。抗人 IL-4 单抗包被于酶标板上，标本和标准 品中的 IL-4 会 与单抗结合， 游离的成分被洗去。 加入生物素化的抗人 IL-4 抗体 和辣根过氧化物酶标记的亲 和素。生物素与亲和素特异性结合；抗人 IL-4 抗体 与结合在单抗上的人 IL-4 结合而形成免疫 复合物，游离的成分被洗去。加入显 色底物，若反应孔中有 IL-4 ，辣根过氧化物酶会使无色 的显色剂现蓝色，加终 止液变黄。在 450nm 处测 OD 值， IL-4 浓度与 OD450 值之间呈正比，可 通过 绘制标准曲线求出标本中 IL-4 的浓度。 试剂盒组成： 1．抗体预包被酶标板（ 8 ×12 或 8 ×6 ） 2 ．冻干标准品（ 2 / 1 支； 0.5ng/ 支） 3 ．标准品和标本稀释液（橙盖瓶）（ 1 瓶； 20ml/12ml ） 4 ．浓缩生物素化抗体（紫盖瓶）（ 1 支） 5 ．生物素化抗体稀释液（蓝盖瓶）（ 1 瓶； 16ml/10ml ） 6 ．浓缩酶结合物（棕盖瓶）（ 1 支） 7 ．酶结合物稀释液（紫盖瓶）（ 1 瓶； 16ml/10ml ） 8 ．浓缩洗涤液 20 × （白盖瓶）（1 瓶；50ml/25ml ） 9 ．显色底物（ TMB ）（棕盖瓶）（ 1 瓶； 12ml/6ml ） 10 ．反应终止液（红盖瓶）（ 1 瓶； 12ml/6ml ） 11 ．封板胶纸（ 6/3 张） 12 ．产品说明书（ 1 份） 标本收集 : 1. 收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆抗凝剂推荐使用 EDTA 。避免使用溶血，高血脂标本。 3. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 4. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于 -20 ℃，-70 ℃电冰 箱内，避免反复冻融， 3-6 月内检测。 5. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍 数稀释 (建 议做预实验，以确定稀释倍数 )。 注意事项 : 1. 试剂盒使用前请保存在 2-8 ℃。复溶后的标准品应分装后， 将其放在 -20 ～-70 ℃ 贮存。 2. 浓缩生物素化抗体，浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使 液体沾到管壁 或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或 1000 转/分离心 1 分钟，以 使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。 取用前，请用移液器小心吹打 4-5 次使溶 液混匀。 3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶 ,属于正常现象，微加热至 40 ℃使结晶 完全溶解后 再配制洗涤液。（加热温度不要超过 50 ℃）使用时洗涤液应为室温。 4. 若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在 -20 ～-70 ℃贮存。 避免反复冻 融。 5. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）。 6. 充分轻微混匀对反应结果尤为重要， 最好使用微量振荡器 (使用最低频率 )，如 无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 7. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。 8. 试验中所用的试管和吸头均为一次性使用，严禁在不同的液体之间混用！否 则将影响试 验结果。 9. 试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他 体液标本时， 请按国家生物试验室安全防护条列执行。 检测前准备工作