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精品文档 细胞周期同步化 在细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中，其中有少数细胞在进行有丝分裂 活动，其余细胞分别处于 G1、S 和 G2各期。不同时相的细胞对药物干预存在不同反应，会 影响实验的重复性，因此，需要获得周期一致性的细胞。利用细胞同步化技术可使细胞大 量的处于同一细胞时期，并可获得该时期大量的物质，如细胞中期时的染色体。 细胞周 期同步化 (synchronization) 是指为了研究某一时相细胞的代谢、增殖、基因表达或凋 亡，借助某种自然或人为的实验手段 , 使细胞群体中处于细胞周期不同时相的细胞停留在同 一时相 ( 除了 G0 期的细胞 ) 的现象。细胞同步化本质上包括用一定的方法 获得一定数量的 同步化细胞群 和 使细胞进入同步化生长 的两层含义。 DNA 合成抑制法 是通过抑制 DNA合成将细胞同步于同一时期的方法。 高浓度 TdR(胸腺 嘧啶核苷 ) 双阻断法 是目前常用的抑制 DNA 合成的同步化方法。它 可逆地 抑制 DNA 合成， 而不影响其他时期细胞的转运，最终可将细胞群 阻断在 S 期或 G1 /S 交界处 。其原理是 : TdＲ是细胞 DNA 合成不可缺少的前体，但向培养基中加入过量 Td Ｒ，可形成 过量 的三磷酸 腺苷，后者能 反馈抑制 其他核苷酸的磷酸化，从而抑制 DNA合成。它将细胞同步于 G1 /S 期交界处， 同步化程度高 ，适用于 任何培养体系 ，可将几乎所有的细胞同步化，但是 容易 产生非均衡生长，个别细胞体积增大 。TdＲ 双阻断法因为简单易行且可逆，在肿瘤药理方 面对细胞周期同步化的实验中得到了广泛的应用。 羟基脲 、5- 氟脱氧尿嘧啶 、阿糖胞苷 、 氨甲蝶呤 和高浓度 ADR、 GDR也属于 DNA合成抑制剂，它们与 TdR 作用相似，均可通过抑制 DNA合成达到同步化的目的。 中期阻断法 是利用 破坏微管 的药物将细胞阻断在 M期 从而得到同一时期细胞的方法，常 用的药物有 秋水仙素 等。秋水仙素通过抑制微管的聚合，进而抑制有丝分裂装置的形成， 将细胞阻断于有丝分裂中期然后再释放使细胞达到同步化。中期阻断法 非平衡生长问题不 明显 ，但 可逆性比较差 ，当 阻断时间过长时，许多细胞产生异常分裂 。过去研究中也发 现，同步后的细胞的生长能力明显不如撤去阻断剂后得到的 S 期细胞旺盛。 秋水仙胺 、 Nocodazole 也是目前常用的中期阻断剂。 经过同步化之后的细胞可以通过 流式细胞术 对其周期进行分析 。将细胞用 PI （碘化丙 啶）染液进行染色，使用流式细胞仪对细胞内 DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期 各时相的百分比。由于细胞的 DNA含量在不同时期有显著的差异，因此可以将细胞分成 G1/G0 期（ 1 倍） ，S 期（ 1-2 倍） 和 G2/M期（ 2 倍） 。流式细胞仪可以 根据 DNA含量 在不 同时间内的变化 , 从而确定细胞周期的长短 , 也可以直接 标记 DNA复制（放射性同位素标 记） , 统计细胞数量与标记细胞的百分比 , 对细胞周期进行综合分析 . 连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程为细胞周 期(cell cyc1e) 。细胞周期包含四个阶段：① G1期 (first