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精品文档 细胞毒性实验设计方案 1. 准 备 材 料 ： DMEM(高 糖 ) 胰 酶 双 抗 ( 青 霉 素 / 链 霉 素 ） DAPI MTT(5mg/mL) DMSO PBS 4% 多聚甲醛 指甲油 6 孔培养板 96 孔培养板 超薄载玻片 培养瓶 (25mL) 一包 0.45 μm 滤膜 灭菌： 50mL ，10mL，5mL离心管 两种枪头 2. 实验方案 本实验所用的 材料 为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅 （SiO2-SS-HA/DOX），在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透明质酸脱离，同时 夹心二氧化硅中药物得以释放。 本实验的 目的为测定透明质酸修饰的夹心二氧化 硅 （SiO2-SS-HA/DOX）的细胞毒性。实验组为 SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX， 空白对照组为纯细胞 , 分别采用 HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和 L929成纤维 细胞为正常细胞模型。 采用 HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为 SiO2-SS-HA/DOX、 SiO -SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞。 培养基中含有 10%(v/v) FBS和 1%(w/v) 2 2 2 双抗 ( 青霉素 / 链霉素 ) 。配制不同浓度的 SiO -SS-HA/DOX、SiO 、HA、DOX药物载 体培养基溶液。 (1). 以 HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型 : 培养基的配置：双抗 1% 血清 12% DMEM 87% 具体操作步骤： 细胞的复活： ①将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入 37℃温水中，使细胞快速溶解。 ②将悬浮的细胞移至离心管中，加 5mL 无血清培养基， 1000rmp,5min 离心 去上清，再加 5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。 （每次转移时，将之前的离 心管洗涤，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。 ） ③将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代： 将 0.25%的胰酶分装至小离心管中， 每个管中 2mL，冻存于 -20 ℃，每次使用 一管，避免反复冻融。 ①将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧，喷 75%的酒精放入超净台。 ②将培养液倒入废液缸， 残留培养基用吸管吸干净， 操作完成后， 培养瓶口 精品文档 精品文档 用火烧。 ③加入 2mL 胰酶将瓶底铺满，消化 2-3min ，于显微镜下观察细胞形态，呈 圆形，即消化完毕，加入 2mL 12% DMEM终止消化，用枪吹打，使细胞悬浮。 ④将细胞悬浮液移入 10mL离心管中， 1000rmp,5min, 离心。 ⑤迅速倒掉上清，加入 6mLDMEM培养基，分装至两个培养瓶中，再各加入 2mLDMEM，至 5mL，于 37℃，5%的 CO培养箱中培养 48h。 2 ⑥下一次传代步骤同① - ⑤。 细胞存活率测定方法（布板，加样） ： ①同传代步骤① - ④。 ②给每个离心管中加入定量的培养基， 并用移液枪来回吸， 使液体混合均匀， 将所有含有细胞的培养基转移到一个