结核病实验室诊断技术新进展8教学幻灯片.ppt

;主要内容; 1、细菌学方法 2、免疫学方法 3、分子生物学方法 ;2、免疫学方法 抗体检测是结核病辅助诊断手段， 对菌阴肺结核有 一定的参考价值。 1、酶联免疫吸附试验 2、免疫胶体金标技术 ;;;3、分子生物学方法 实时荧光定量PCR技术：也称分子信标技术，是今年发展起来的核酸定量技术。是PCR与核酸探针技术的结合，将PCR较高的灵敏度和核酸探针的高特异性相结合。 PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5－3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 ;*;*;两种方法观察结果;中盖项目LED评估结果;中盖项目LED评估结果;*;BCG进化过程;*;*;*;;*;*;*;*;*;*;中盖项目线性探针检测利福平评价;中盖项目线性探针检测异烟肼评价;中盖项目线性探针检测MDR评价;WHO POLICY STATEMENT 27 JUNE 2008;基因芯片;检测过程;芯片结果图例;*;是一种半定量巢式实时PCR的检测方法，能检测杆菌和利福平耐药性。扩增出ropB基因含有81bp的核心区序列，探针能够区分野生型基因序列与突变型基因序列。 集样本准备、扩增和实时检测于一体。 盒子中含有冻干的试剂，缓冲液和洗涤液。使用6色激光检测装置对靶核酸进行实时检测。;? 标本类型：临床痰标本，或浓缩处理后的标本（涂阳或涂阴培阳），不能用于用于治疗随访的病人。 ? 对涂阴培阳病人具有非常高的敏感性和特异性 ?可同时检测患者是否结核以及是否对利福平耐药 ? 两小时内即可得到检测结果，所用仪器设备简单 ?不需要生物安全柜，满足涂片试验条件的实验室 ? ;? 利福平耐药阴性预测值： 在结核病利福平耐药流行低或高的地区，NPV大于99%.即阴性结果能排除RIP耐药 ?利福平耐药阳性预测值： RIP耐药流行＞15%???PPV＞90% RIP耐药流行5% ～ 10%，PPV：71%～84% RIP耐药流行＜5%，PPV：＜70%，在这种情况下，RIP耐药的结果需要传统的DST证实。 ;基于核酸扩增的一步法利福平耐药检测;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*; 未来实验室的诊断模式 ;结核病实验室未来检测模式; 以病人为中心的实验室诊断技术平台 ;*