2013临床病理学思考题及答案.doc

临床病理学思考题及答案一 分子临床病理 1.请结合自己的专业，简单设计一个免疫组织化学标记的方案来研究一个课题（一抗和二抗的名称和来源，一抗的定位预测；实验方案，生物学意义和临床意义，实验设计（每个对照组的意义）。结果判断。 一抗要求特异性高，现用单克隆抗体较多，主要用于结合底物，二抗要求能识别一抗，要求广谱抗体，现在的二抗多是二抗加亲和素生物素的复合物。一抗如果是兔抗人的抗体，二抗应该是另一种动物抗兔的抗体。 （1）要设计试剂对照 确定第一抗体和第二抗体是否具有抗原特异性。其中要确定第一抗体对阳性组织的最佳稀释度；第二抗体对组织蛋白的无反应性。 阴性试剂对照：用一个阴性试剂替代一抗或控制步骤目的：用来评价非特异性染色，并较好解释抗原部位的特异性标记。 （2）组织对照。 ①阴性组织对照 例如：正常肝组织用于对照HBsAg阳性的肝细胞检测 ②阳性组织对照 有已知的、含目标抗原的样本 目的：监控抗原是否存在；监控抗原敏感性是否丧失。 ③组织内对照 可以消除不同组织间固定造成的差异，另一个优点是可以不使用阳性对照标本。 出现假阳性的几种原因 1. 抗体的稀释度不正确、浓度太高。BigBee现象 2. 部分多克隆抗体由于特异性等问题将出现异常表达，如S100、Lysozyme、Myoglobin等可在鳞状上皮细胞中表达。 出现假阴性的几种原因 1. 抗体和检测试剂盒配对是否合理。如单克隆抗体（多为鼠），其检测试剂盒应该用鼠的试剂盒，多克隆抗体（多为兔）应该用兔的试剂盒。 抗体的浓度太低。 2. 3. 孵育的时间太短。 4. 固定和温度。 5. 染色步骤是否正确。 6. 染色过程中切片过分干燥。 出现背景着色的几种原因 1. 内源性过氧化酶没有完全阻断。 2. 正常动物血清使用不合理，如第二抗体为羊抗鼠IgG,应该用羊的正常血清。 3. 脱蜡不够彻底。 4. 组织粘贴剂使用不当或太浓。 5. PBS冲洗不够。 6. 抗体稀释不合理，浓度太高。 7. 底物显色时间太长。 结果判断标准 由于影响因素很多，如不同厂家生产的同一种抗体特异性和敏感性的差异、所用的检测试剂盒特异性和敏感性的差异、技术熟练程度以及固定包埋等，其结果判断的标准化问题尚难统一。 有一些原则必须掌握； ① 阳性细胞定位是否明确，是胞膜、胞浆还是胞核阳性 ② 间质清晰，无背景着色。 ③ 阳性细胞要在5％以上，才能定为阳性。 ④ 参考评价： ＜5% -, 5％－25％ ＋， 25％－50％ ＋＋，＞50％ ＋＋＋ 答案2： A.实验一：供传染科医生使用 一抗：鼠抗人MMP-2单克隆抗体（鼠抗人VEGF单克隆抗体、鼠抗人MMP-9单克隆抗体） 二抗：羊抗小鼠Biotin标记抗体 一抗的定位预测：表达在肝组织的细胞浆中 实验方案：选择原发性肝细胞癌组织、肝癌旁组织、正常肝组织三组石蜡标本切片。通过抗体标记MMP-2（VEGF、MMP-9），经过免疫组化染色后判定相关蛋白表达与肝细胞癌的临床病理特征的关系。 生物学意义：VEGF是肿瘤血管生成和侵袭转移过程中的关键因素，可以通过其相关的特异可以降解基底膜糖蛋白以及细胞外机制的大MMPs（性受体选择性作用于内皮细胞发挥作用． 部分成分，细胞外机制和血管基膜的降解和肿瘤的侵袭转移密切相关）。 临床意义：通过降低VEGF的RNA和其相关蛋白的表达，可能抑制原发性肝细胞癌的生长，降低肿瘤的转移风险(MMP-2、MMP-9被称为明胶酶A、B，其过度表达与肝细胞癌侵袭转移密切相关，可以作为预测肝癌预后的指标)。 实验设计：通过设立癌旁组织和正常肝细胞组织的对照组，对比各组所研究蛋白在不同组织中表达的差异，进而得出实验结论。 结果判断：采用S-P免疫组化染色后，利用电脑的病理图文报告分析系统进行结果判读，对染色结果定量分析。 2.免疫组化的应用范围。 （1） 提高病理诊断准确性 （2） 对疾病的预后和治疗的意义 （3） 癌基因蛋白的应用 （4） 对肿瘤增生程度的评价 ki-67,PCNA （5） 微小病灶的发现 微小癌， 微小病灶（如羊水栓塞） （6） 在肿瘤分期上的意义 （7） 指导肿瘤的治疗 （8） 免疫性疾病的辅助诊断 （9） 病原微生物的检测 3.何谓“套餐式”免疫标记？举两例说明 临床病理学常用“套餐式标记”选用 ① Keratin 角蛋白 上皮细胞 ② Vimentin 波纹蛋白 间质细胞 ③ S-100 神经内分泌细胞 ④ LCA 血细胞 不同组合有不同意义， 举例。（参见老师PPT,有两张表，很详细） 胃肠道间质肿瘤“套餐”式标记及分子检测 乳腺癌“套餐”式