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- 2020-08-06 发布于福建
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Southern Blot
核酸杂交的定义
杂交( Hybridization):如果把不同的DNA链放
在同一溶液中做变性处理,或把单链DNA与RNA放
在一起,只要有某些区域(当然也可以是链的大
部分)有成立碱基的可能,它们之间就可形成局
部的双链,这一过程称为核酸杂交。
● Southern blot:检测DNA
● Northern Blot:检测RNA
Southern Blot的原理
●DNA经过标准琼脂糖电泳按分子大小分离,再
经原位变性,从胶上转到固相支持物上。附于膜
上的DNA可以与标记的DNA,RNA或寡核苷酸
探针杂交,通过特定的检测方法如放射自显影可
以确定与探针互补的条带位置。
尼龙膜(阳性电荷):400-500ug核酸/cm2
变性转移液:0.4moL/ L Naoh、1mol/ L NaCl
水相缓冲液杂交溶液:6*SSC
预杂交液:
6×SSC(或6×SSPE)
5× Denhardt试剂
0. 5% SDS
lug/ml poly a
l00μg/ml经变性并断裂成片段的鲑精DNA
探针
Southern Blot操作流程
1、将DNA转移至尼龙膜;
2、尼龙膜洗涤、固定;
3、与探针杂交;
4、成像或显色。
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