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临床微生物学检验技术 第二章 真菌检验基本技术 临床微生物学检验技术 真菌学概述 真菌（fungus ），属于真核细胞 型微生物，与 原核细胞型微生物有很多区别 真菌细胞壁含有甲壳质（chitin ）和β-葡聚糖营 养方式为吸收，无吞噬作用，营腐生、寄生、共 生和超寄生生活。 2 临床微生物学检验技术 第一节 真菌的形态学检查 3 临床微生物学检验技术 一、直接镜检 直接镜检就是从人(或动物)体内直接采取标本制片、 显微镜下直接观察，标本不需染色处理，直接镜检对真菌 病的诊断较细菌更为重要 优点：方法简便，快速 角质标本 10%KOH 低倍/高倍镜检查有无 （皮肤癣菌） 微加热 菌丝/孢子 4 临床微生物学检验技术 二、染色镜检 常用染色方法 • 常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色，乳酸 酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。 • 对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞氏染色 或姬氏染色后镜检。 • 检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染色后检 查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色 5 临床微生物学检验技术 第二节 真菌的培养与鉴定技术 6 临床微生物学检验技术 一、分离培养 真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。 培养成功与否与采集的标本是否适当、是否新鲜、培 养基的选择、培养温度与时间等有关。 大多数真菌培养的温度为28℃，但深部真菌为37℃。 对二相性真菌培养时,28℃培养真菌呈菌丝相（霉菌型）， 37℃培养为组织相（酵母型）。 7 临床微生物学检验技术 一、分离培养 真菌培养方法 • 平皿培养:表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态， 但水分易蒸发，只能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵 母菌、隐球菌。 • 大试管培养:水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真 菌菌种的保存。 • 玻片培养(微量培养、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。 8 临床微生物学检验技术 一、分离培养 观察菌落形态时注意 1.菌落性质，是酵母菌还是霉菌； 2.菌落大小,一般病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落 大； 3.菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深； 4.致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉;致病性真菌 有时使培养基开裂，但污染霉菌很少引起培养基开裂。 9 临床微生物学检验技术 二、鉴定试验 菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态 是远远不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴