选修课 转基因技术及应用 201910.ppt

31 VEGFR-2 在伤口愈合过程中的诱导表达 生 物 发 光 强 度 Vegfr2-luc 转基因小鼠 使用小鼠 VEGFR2 （血管内皮细胞生长 因子受体 2 ）基因启动子及内皮细胞特异 的增强子，以驱动荧光素酶表达。 32 VEGFR2-Luc 转基因小鼠的 VEGFR2 表达逐渐降低 , 研究生物体发育过程 33 转基因鲑鱼 野生鲑鱼 表达红色荧光蛋白的转基因鱼 34 乳腺反应器 在制备转基因哺乳动物，若对目的基因 的改造有意选择乳腺细胞特异性表达的启 动子和增强子，那么目的基因将在动物的 乳腺细胞中大量表达，并从乳汁中分泌出 来。这时转基因动物乳腺就成为一个为生 产某种生物活性蛋白的生物反应器，即乳 腺反应器。 35 乳汁中分泌人凝血因子 IX 的转基因山羊 36 转基因动物存在的问题 1 ）制作转基因动物成功率低、成本高 2 ）外源基因表达水平较低 3 ）造成宿主基因突变 37 三、从基因工程到转基因植物 1. 利用基因工程获得携带有目的基因的重 组 DNA 或重组菌体（ 35S 启动子的应用 增强基因表达效率）。 2. 目的基因导入（农杆菌介导或基因枪轰 击）植物细胞或组织。 3. 筛选重组植物细胞。 4. 植物细胞促分化培养。 5. 植株鉴定。 38 gene of interest promoter terminator right T border promoter plant selectable marker terminator left T border bacterial selectable marker replication region 重组 Ti 质粒 39 目的基因的导入 ---- 利用农杆菌介导 农杆菌共培养侵染 诱导愈伤组织 分化生芽 生根 1 转基因技术及应用 现代分子生物学专题讲座 分子生物学研究中心 主讲：陈慧勇 Transgenic Technology and Applications 2 转基因技术 将人工分离和修饰过的基因导入细 胞和（或）生物体内，并通过导入基 因的表达引起生物体性状的可遗传性 修 饰 。 这 一 技 术 称 之 为 转 基 因 技 术 （ Transgenic technology ）。 3 转基因生物 经转基因技术修饰的生物体被称为“遗 传 修 饰 过 的 生 物 体 ” （ Genetically modified organism ，简称 GMO ），或 转基因生物（ transgenic organism ） ， 包括转基因微生物、转基因植物及转 基因动物。 4 一、基因 - 基因工程 - 转基因微生物 Promoter Gene 1 Gene 2 Gene 3 Terminator 多个结构基因串联 转录调控序列 原核生物基因结构示意图 5 exon intron ATG TAA Poly A site AATAAA, 30bp downstream enhancer terminator downstream silencer initiation site promoter upstream silencer upstream enhancer coding strand template strand 5' 3' 1 2 n 1 2 n-1 TATA box CAAT box GC box 真核生物基因结构示意图 6 基因工程（ gene engineering ）： 指在 体外对 DNA 分子按照既定的目的和方 案，对 DNA 进行剪切和重新连接，然 后把它导入宿主细胞，以扩增有关 DNA 片段或表达有关基因产物等研究。 又称为基因操作、分子克隆、基因克 隆或基因重组等。 7 基因工程技术操纵主要步骤（ Ⅰ ） 重组体 8 重组原核表达载体 某 真 核 基 因 cDN 序 列 9 基因工程技术操纵主要步骤（ Ⅱ ） 重组体 DNA 水平检测 基因表达水平检测 10 通过基因工程技术获得的经过遗 传改造并能稳定遗传的微生物即 转基 因微生物 。 但要获得多细胞的转基因生物， 还须进行其它操纵。 11 转基因微生物应用举例 ? 转有凝乳