菌种鉴定工作是各类微生物学实验室都经常遇到的基础性工作共30页.ppt

菌种鉴定工作是各类微生物学实验室都 经常遇到的基础性工作。不论鉴定对象 属哪一类，其工作步骤都离不开以下三 步：①获得该微生物的纯种培养物；② 测定一系例必要的鉴定指标；③查找权 威性的鉴定手册。 第四节 微生物分类鉴定的方法 通常把鉴定微生物的技术分成四个不同水平：①细 胞的形态和习性水平，例如用经典的研究方法，观察 细胞的形态特征、运动性、酶反应、营养要求和生长 条件等。②细胞组分水平，包括细胞组成成分例如细 胞壁成分，细胞氨基酸库，脂类，醌类，光合色素等 的分析，所用的技术除常规实验室技术外，还使用红 外光谱、气相色谱和质谱分析等新技术。③蛋白质水 平，包括氨基酸序列分析、凝胶电泳和血清学反应等 若干现代技术。④基因或 DNA 水平，包括核酸分子杂 交（ DNA 与 DNA 或 DNA 与 RNA ）， G ＋ Cmol% 值的 测定，遗传信息的转化和转导， 16S rRNA （核糖体 RNA ）寡核苷酸组分分析，以及 DNA 或 RNA 的核苷 酸顺序分析等。 在微生物分类学发展的早期，主要的 分类鉴定指标尚停留在细胞的形态和习性 水平上，这类方法可称作经典的分类鉴定 方法；从本世纪 60 年代起，后三个水平 的分类鉴定的理论和技术即化学分类学开 始发展，度为探索微生物的自然分类系统 打下了坚实的基础，这些方法再加上数值 分类法，可称为现代的分类鉴定方法。 一、经典分类鉴定方法 所谓经典的分类鉴定方法，是相对 于现代的分类鉴定方法而言的，通常 指长期以来在常规鉴定中普遍采用的 一些形态、生理、生化、生态、生活 史和血清学反应等指标 . 群体：菌落形态，在半固体或液体培养基中的生长状态等 ? 形态 个体：细胞形态，染色反应，各种特殊构造等 ? 营养要求：能源，碳源，氮源，生长因子等 ? 生理、生化反应 酶；产酶种类和反应物性等 ? 代谢产物：种类，产量，显色反应等 ? 经典指标 生态特性：生长温度，对氧的需要，宿主种类等 ? 生活史特点 ? 血清学反应 ? 噬菌体的敏感性 ? 其它 经典分类法 经典分类法是一百多年来进行微生物分类 的传统方法。其特点是人为地选择几种形态 生理生化特征进行分类，并在分类中将表型 特征分为主、次。一般在科以上分类单位以 形态特征、科以下分类单位以形态结合生理 生化特征加以区分。 ? A. 能在 60 o C 以上生长 ? B. 细胞大，宽度 1.3~1.8mm ………………… 1. 热微菌属 ( Thermomicrobium ) ? B. 细胞小，宽度 0.4~0.8mm ? C. 能以葡萄糖为碳源生长 ? D. 能在 pH4.5 生长 …………………………… 2. 热酸菌属 ( Acidothermus ) ? DD. 不能在 pH4.5 生长 …………………………………… 3. 栖热菌属 ( Thermus ) ? CC. 不能以葡萄糖为唯一碳源 ……………… 4. 栖热嗜油菌属 ( 栖热嗜狮 菌属 Thermoleophilum ) ? AA. 不能在 60 o C 以上生长 二、现代分类鉴定方法 ? 近年来，随着分子生物学的发展和各项新技术 的广泛应用，促使微生物分类鉴定工作有了飞 速发展。对微生物鉴定工作来说，已从经典的 表型特征的鉴定深入到现代的遗传学特性的鉴 定、细胞化学组分的精确分析以及利用电子计 算机进行数值分类研究等新的层次上。 ? （一）微生物遗传型的鉴定 ? DNA 是除少数 RNA 病毒以外的一切微生物的遗 传信息载体。每一种微生物均有其自己特有的、 稳定的 DNA 成分和结构，不同微生物间 DNA 成 分和结构的差异程度代表着它们间新缘关系的 远近。因此，测定每种微生物 DNA 的若干重要 数据，是微生物鉴定中极其重要的指标： 1. DNA 的碱基组成 (G+Cmol%) ?