Neuritin表达水平对肝细胞中HSP60影响的相关性研究.pdf

摘要 目的：探讨 Neuritin 在不同表达水平下对肝细胞中 Hsp60 的影响及对肝细胞凋亡调节的分子机制。 方法：将 20 盘含有 Buffalo Rat Liver(BRL)肝细胞的 100mm 培养皿，随机分为 4 大组，分别为 Neuritin 低表达组、Neuritin 高表达组、Hsp60 低表达组、Hsp60 高表达组。再将上述每一个大组 分成五小组，对照组（n = 1 ）和实验组（n = 4 ），对照组不接受干预，Neuritin 低表达组中实验 组分别给予 0.1ug/ml、0.3ug/ml、0.5ug/ml、0.7ug/ml 的Neuritin 抗体；Neuritin 高表达组中实验组 分别给予 0.5ug/ml、1.0ug/ml、1.5ug/ml、2.0ug/ml 的 Neuritin 蛋白；Hsp60 低表达组中实验组分 别给予 0.6ug/ml、0.8ug/ml、1.0ug/ml、1.2ug/ml 的Hsp60 抗体；Hsp60 高表达组中实验组分别给 予 10×10-3ug/ml、50 ×10-3ug/ml、100×10-3ug/ml、200 ×10-3ug/ml 的 Hsp60 蛋白，48 小时后 使用免疫印迹试验（Western blotting ）测定目标蛋白在对应干预条件下的表达变化水平。进一步 采用细胞免疫荧光的方法检测 Neuritin 、Hsp60 在肝细胞内的位置及共定位，最终讨论两者在肝 细胞中的可能分子机制。 结果：（1）与对照组相比，Western blotting 表明实验组 Neuritin 蛋白在 BRL 细胞中的低表达及 过表达，其相对表达程度渐渐减低和增高，而 Caspase-3 含量则是渐渐变多和减低，两者差异均 有统计学意义(P＜0.05)；Hsp60 蛋白含量基本一致。Neuritin 相对表达量变化趋势与 Caspase-3 相 对表达量变化趋势之间存在明显负相关性（r = -0.993 ，P <0.05 ）。（2 ）与对照组相比，Western blotting 表明实验组 Hsp60 蛋白在 BRL 细胞中的低表达和过表达，其表达程度渐渐减低和增高，而 Caspase-3 含量却是渐渐变多和减低，两者差异均有统计学意义(P＜0.05) ；Neuritin 蛋白表达水平 基本一致。Hsp60 相对表达量变化趋势与 Caspase-3 相对表达量变化趋势之间同样存在明显负相 关性（r = -0.996 ，P<0.05 ）。（3 ）Neuritin 和 Hsp60 在细胞免疫荧光中 Merge 后定位在细胞膜。 结论：（1）细胞免疫荧光证实Neuritin 和 Hsp60 在肝细胞中共同定位在细胞膜，提示 Neuritin 和 Hsp60 蛋白存在相互作用。 （2 ）Neuritin 蛋白和凋亡蛋白 Caspase-3 表达呈现相反的变化趋势， Hsp60 蛋白和凋亡蛋白 Caspase-3 的表达也呈现相反的变化趋势，由此推测Neuritin 和 Hsp60 可 能通过某种协同作用共同参与肝细胞的抗凋亡调控机制。 关键词：Neuritin ；Hsp60 ；Caspase-3;肝细胞。 II Abstract Objective: To explore the effect of Neuritin at different expression levels on HSP60 in hepatocytes and the molecular mechanism of regulation of hepatocyte apoptosis. Methods:Twenty plates of 100mm petri dishes conta