植物生理学实验 赤霉素对α 淀粉酶的诱导形成2019.ppt

赤霉素诱导 α - 淀粉酶的合成 王衍安 主要内容 基本知识 α - 淀粉酶、赤霉素 实验目的 验证赤霉素诱导α - 淀粉酶形成的生理作用， 掌握对该酶活性定量测定的原理与方法。 基本技能 1 、理解赤霉素对α - 淀粉酶的诱导的原理 2 、赤霉素的生物学测定方法 3 、标准曲线的绘制并分析结果 实验原理： ? 种子萌发过程中消耗贮藏物质，需要在一系列酶 的催化作用下才能进行。这些酶有的已经存在于 干燥种子中，有的需要在种子吸水后重新合成。 实验原理： 种子萌发过程中淀粉的分解主要是在淀粉酶 的催化下完成的。 淀粉酶在植物中存在多种形式： α - 淀粉酶 β - 淀粉酶 β - 淀粉酶已经存在于干燥种子中，而 α - 淀粉酶 不存在干燥种子中，需要在种子吸 水后重新合成。 实验原理： 淀粉性种子在萌动过程 胚 释放 GA α - 淀粉酶基因表达 α - 淀粉酶 催化淀粉水解为糖 糊 粉 层 细 胞 胚 乳 在萌发的禾谷 类种子中， GA S 刺 激许多酶的产生， 最显著的是α - 淀粉 酶 诱导 α - 淀粉酶的形成 胚 芽鞘 盾片 GA 根 水解时 果皮和种 皮 糊 粉层 胚乳 大麦种子萌发时赤霉素诱导水解酶生成和作用示意图 赤霉素诱导糊粉层细胞淀粉酶的合成和分泌 实验原理： ? 外加的赤霉素可以代替胚的释放作用，从而诱导 α - 淀粉酶的合成。 – 这个反应是极其专一的，被用来作为赤霉素的 生物鉴定法 ? 去胚的吸胀大麦种子外加赤霉素，诱导 α - 淀粉酶 形成，催化淀粉水解为糖。 实验原理 测定依据：碘试法 碘（ I 2 – KI ） 遇淀粉或糊精会出现不同的颜色 通过碘试法比色测定淀粉在酶催化反应过程中的 消耗量，可以定性和定量地分析 α - 淀粉酶的力。 淀粉的聚合度和生成碘包合物的颜色 聚合度 3.8 7.4 12.9 18.3 20.2 29.3 34.7 以上 颜色 无色 淡红 红 棕红 紫色 蓝紫色 蓝色 实验内容 用不同浓度赤霉素处理淀粉类种子，通过碘试法定 量测定α - 淀粉酶的活力。 实验材料： 大麦种子 实验设计： 无胚、有胚、无胚＋ GA 处理 GA 3 ＝ 2 × 10 – 8 mol/L 实验步骤 （一）标准曲线的绘制 取不同浓度的淀粉（ 0 、 10 、 20 、 30 、 40 、 50μg/ml ）各 2.0ml ，分别加入 I 2 -KI 溶液 2.0ml ，蒸 馏水 5.0ml ，充分摇匀，于波长 580nm 下测定吸光 度值，以淀粉浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标 制作标准曲线。 C(μg/ml)=151.97D 580 +0.058 R 2 =0.9995 （二）操作步骤 1. 选种与处理 : 选取大小一致、健康的大麦种子 80 粒，用刀片将每 粒种子横切成两半，无胚的半粒和有胚的半粒。 X Y 有胚 无胚 有胚 有胚 无胚 处理 赤霉素溶液 醋酸 缓冲液 （ ml ） 试验材料用量 重复 编号 浓度 （ mol.L -1 ） 用量 （ ml ） P 0 1 1 10 个有胚半粒 P1 ～ 4 O 0 1 1 10 个无胚半粒 O5 ～ 8 G 2 × 10 -8 1 1 10 个无胚半粒 G9 ～ 12 2. 取 12 只离心试管，编号 按照 下表 加入各种溶液和材料 （二）材料的处理与测定 1. 选种与处理 选取大小一致、健康的大麦种子 60 粒，用刀 片将每粒种子横切成两半，使成无胚的半粒 和有胚的半粒， 分别置于新配制的 1 ％次氯 酸钠溶液中，消毒 15min ，取出用无菌水冲 洗数次， 备用。 2. 淀粉酶的诱导 取具塞试管 12 只，按表 1 加入各种溶液和材 料，于 30 ℃下振荡培养 24h 。 处理 重复 0.1 ％淀 粉磷酸液 （ ml ） 培养液 （ ml ） 30 ℃ 保温时间 （ min ） I 2 -KI 溶液 （ ml ） 蒸馏水 （ ml ） P1~4 1.9 有胚 0.1 摇匀 10 2 5 O5~8 1.9 无胚 0.1 摇匀 10 2 5 G9~12 1.9 无胚 GA -8 0.1 摇匀 10 2 5 3. 淀粉酶活性分析： 0.1 ％淀粉磷酸液放置在冰箱中，使用后放回原处 实 验 步 骤 选种、切种 淀粉酶的诱导 （ 30 ℃下培养 24h ） 酶提液 0.1ml 30 ℃ 保温 10min I 2 -KI 溶液 2.0mL 蒸馏水 5.0mL 淀粉液 1.9ml 计算 比色（ 580nm) 波长 580nm 下测定吸光度 空白？ 赤霉素对 α －淀粉酶的诱导形成数据记载表 无胚 有胚 无胚＋ GA 重复 1 重复 2 重复 3 重复 4 平均值 淀粉含量