第25章-病毒感染的检查方法.pdfVIP

精品文档 第 25 章 病毒感染的检查方法 与防治原则 第一节 病毒的诊断 随着对病毒感染从生物学及分子生物学水平的研究进展， 病毒的诊断技术已 由传统方法扩展至新的快速诊断技术。 病毒感染的快速诊断有利于对病毒感染者 的治疗；例如对有些病毒（如疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒）感染已有较特异的 抗病毒药物治疗。 早期诊断及早期治疗对控制病毒感染十分重要。 此外， 从群体 感染角度分析，确诊病毒感染的病原在监测病毒的流行病学（如新型流感病毒、 肺出血型汉坦病毒的发现等）方面也有重要的现实意义。 标本的采集与送检 用于分离病毒或检测病毒及其核酸的标本应采集病人 急性期标本。根据不同病毒感染采取不同部位的标本（如鼻咽分泌物、脑脊液、 粪便或血液）。由于病毒在室温中很易被灭活， 应在采集和运送标本中注意冷藏。 如欲检测抗体，早期单份血清可用于检测 IgM 抗体，而欲检测早期与恢复期的 抗体效价的变化， 则需采集早期与恢复期双份血清。 血清抗体检测标本应保存于 －20 ℃。 病毒的分离、培养与鉴定 目前最常用的方法是细胞培养。在注明欲检测的病毒后， 病毒分离培养的实验室将选择适当的原代培养细胞 （敏感性高）及传代细胞系 （便于在实验 室保存） 作病毒分离培养。 接种标本后， 细胞可出现病变或也可并不出现病变而需用血细胞 吸附等方法检测是否有病毒增殖， 并进一步还需用特殊的抗体鉴定病毒的种类， 例如用特异 荧光抗体染色或抗体中和试验等。当无病毒增殖时，可能标本中病毒含量较低，未被检出， 则需要盲目传代 3 次后方可明确标本中是否存在病毒。这一分离与鉴定病毒的全过程有时 可长达 2 ～3 个月，而且仅在有设备、实验条件及合格工作人员的实验室方可进行。虽然这 随意编辑 精品文档 种方法所需时间长、步骤多，但在确定病原上是“黄金标准” ，即其准确性高而无误。如我 国台湾省确定由肠道病毒 71 型引起多数患儿发生脑膜炎并致死的研究报道， 就是由分离培 养及鉴定病毒所确诊。 如欲提高病毒感染细胞培养的敏感性， 可将病毒接种于内有盖玻片的 细胞培养瓶，经低温离心后，以增加病毒与细胞接触的机率。 再将盖玻片进行培养，并用单 克隆抗体染色，藉以通过检测病毒的早期抗原进行诊断。 在流感病毒的分离培养中， 最敏感而特异的方法是鸡胚接种， 并用血凝和血 凝抑制试验以鉴定病毒。 此外，细胞培养也可应用。 分离流感病毒在发现新变异 株中具有重要价值。 接种动物分离病毒的方法目前已很少应用， 但对狂犬病病毒 及乙型脑炎病毒的分离与鉴定中还需应用动物接种， 并结合用特异抗体作中和试 验或作免疫荧光染色以鉴定病毒种类。 检测病毒抗原及抗体方法 对于一些血清型别不多的病毒或在寻常细胞培 养系统中还不能成功增殖的病毒， 直接检测抗原是快速而实用的方法。 这一方法 要求标本中有一定量的抗原和具备高质量的抗体； 其原则为免疫学技术， 即用特 异标记的抗体检测