中国药科大学生化设计性实验报告参考酵母RNA提取组分鉴定和含量测定.pptVIP

实验六 酵母RNA的提取、组分鉴定和含量测定 【实验目的】 1学习稀碱法提取RNA的原理和操作方法。 2.了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的 方法。 3掌握地衣酚显色法及紫外分光光度法测定 酵母RNA含量的原理和方法 【实验原理】 酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液, 在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核 糖核酸沉淀,由此即得到RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各 组分。加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可 以测出上述组分的存在。 RNA含量测定,除可用紫外吸收法、定磷法外, 常用地衣酚法测定。其反应原理是:当RNA与 浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转 变为糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚 orsino反应,在Fe3或Cu催化下,生成鲜绿 色复合物 反应产物在670mm处有最大吸收,RNA浓度 在10-100g/m1范围内,光吸收与RNA浓度成正 比。地衣酚法特异性差,凡戊糖均有此反 应,DNA和其他杂质也能与地衣酚反应产生类似 颜色。因此,测定RNA时可先测得DNA含量再计 算RNA含量。 【实验材料和主要仪器、试剂】 1.实验材料: 酵母粉(或酵母片) 2实验仪器 研钵、150皿锥形瓶、恒温水浴锅、布氏漏斗 及抽滤瓶、离心机、漏斗、分光光度计。