流式细胞仪地原理和用途.pdfVIP

流式细胞仪（ Flow Cytometry ） 1 流式细胞仪的概念及其发展历史 1． 1 流式细胞仪的基本概念 流式细胞仪（ flow cytonletry ，FCM）是对高速直线流动的细胞或生物微粒 进行快速定量测定和分析的仪器，主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采 集和分析技术等。 流式细胞仪以流式细胞术为理论基础，是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫 学、细胞荧光化学和计算机等学科知识综合运用的结晶。 流式细胞术是一种自动分析和分选细胞或亚细胞 的技术。其特点是：测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量，即对同一个细胞做有关物理、生物化 学特性的多参数测量，且在统计学上有效。 1．2 流式细胞仪的发展简史 最早的流式细胞仪雏形诞生于 1934 年， Moldavan 提出使悬浮的单个血红细 胞 流 过 玻 璃 毛 细 管 ， 在 亮 视 野 下 用 显 微 镜 进 行 计 数 ， 并 用 光 电记 录 装 置 测 量 的 设 想 。 1953 年 Crosland-Taylor 根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。 其后又经过 Coulter 、Parker Horst 、 Kamentsky 、Gohde、Fulwyler 、Herzenberg 等人的不断改进，设计了光电检测设备和细胞分选装置、完成 了计算机与流式细胞仪的物理连接及多参数数据的记录和分析、开创了细胞的免疫荧光染色及检测技术、 推广流式细胞仪在临床上的应用。 近 20 年来，随着流式细胞仪及其检测技术的日臻完善， 人们越来越致力 于样品制备、细胞标记、软件开发等方面的工作，以扩大 FCM的应用领域和使用效果。 宋平根的《流式细胞术的原理和应用》是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述的最为详尽和透彻的中文著 作。这本书非常详细地介绍了流式细胞术的历史、结构、原理、技术指标等，例举了其在医学和生物工程 中的应用， 非常适合从事此方面专业研究的人。由于这本书是 13 年前出版的， 所以基本上没有涉及植物流 式细胞仪检测技术。此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识的人士来说，这本书太复杂太深奥。谢小 梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中的应用。杨蕊概括了流式细胞仪的工作原理，简单提及了流式细胞 仪的应用。本文在分析这三篇论著或文章的优缺点后，用比较通俗的语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术 必须了解的一些原理，并对目前市场上的主流型号进行了客观的性能概括。 2 流式细胞仪的工作原理和技术指标 2．1 流式细胞仪工作原理 除电源外，流式细胞仪主要由四部分组成：流动室和液流系统：激光源和光学 系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统，其中流动室是仪器的核心部件。这四大部件共同完成了信 号的产生、转换和传输的任务。 流动室和液流系统 流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和 制作均很精细， 是液流系统的心脏。 样品管贮放样品， 单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出； 鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流 速度 υ10m/s 。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体，受到 振荡信号可发生振动。 激光源和光学系统 经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。 常用的光源有弧光灯 和激光； 激光器又以氩离子激光器为普遍 ，也有配和 氪离子激光器 或染料激光器。 光源的选择主要根 据被激发物质的激发光谱而定。汞灯是最常用的弧光灯 ，其发射光谱大部分集中于 300 ～ 400nm，很 适合需要用紫外光激发的场合。氩离子激光器的发射光谱中，绿光 514nm 和蓝光 488nm 的谱线最强， 约占总光强的 80%；氪离子激光器光谱多集中在 可见光 部分，以 647nm 较强。免疫学上使用的一些荧 光染料激发光 波长 在 550nm 以上，