生化分离工程_苏海佳_第三章细胞破碎.pptxVIP

Chapter 3 Cell Disruption 第三章 细胞破碎;微生物的代谢产物;细胞破碎是指：选用物理、化学、酶或机械的方法来破坏细胞壁或细胞膜。;3·1 细胞壁结构和化学组成;1. 细菌的细胞壁 所有的细菌细胞壁由坚固的骨架——肽聚糖组成 ;所有细菌都含有肽聚糖的网状结构。 革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，约15-50nm，肽聚糖含量占40%一90%。其余是多糖和磷壁酸； 革兰氏阴性菌的肽聚糖层约1.5-2.0nm，外有一外壁层约8-l0nm，由脂蛋白和脂多糖及磷脂构成的两层外壁层。 革兰氏阳性菌的细胞壁比革兰氏阴性菌坚固，较难破碎。;Gram-negative procaryotes 革兰氏阴性原核生物（E.coli）;1、里层葡聚糖的细纤维——细胞壁的刚性骨架； 2、覆盖在细纤维上的是一层糖蛋白； 3、外层是由1，6—磷酸二脂键共价连接而成的网状结构的甘露聚糖； 4、其内部有甘露聚糖—酶的复合物。;植物细胞壁的主要组成成分是纤维素 在初生壁上还有半纤维素和果胶质;就是使细胞壁和细胞膜受到不同程度的破坏 (增大通透性)或破碎，释放其中的目标产物。 ;※ 3.2 细胞破碎和产物释放原理;利用化学、生化试剂或酶改变细胞壁或细胞膜的结构，增大胞内物质的溶解速率，或完全溶解细胞壁，形成原生质体，在渗透压作用下，细胞膜破裂释放胞内物质。;;※ 3.3 mechanical disruption 机械破碎;1、处理量大，破碎快，时间短，效率较高，工业规模的重要手段； 2、作用力：挤压，剪切和撞击作用； 3、在许多情况下，细胞内含物全部释放出来； 4、由于机械搅拌产生热量，破碎要采用冷却措施。;1. 高压匀浆法（high-pressure homogenization） ;高速匀浆破碎的动力学方程为：;影响因素：;优点： 1、操作参数少，且易于确定； 2、样品损失量少，在间歇处理少量样品方面效果好 3、适用于酵母和大多数细胞的破碎。;原理：细胞悬浮液与玻璃珠（或石英砂，或氧化铝）一起高速搅拌，研磨使细胞达到某种程度破碎，;WSK卧式高效全能珠磨机; 两种情况下，细胞破碎动力学可近似表示为：;1、随细胞种类而异； 2、同一进料速度，细胞浓度?，则破碎率?，能耗?； 3、同一悬浮液中，破碎的能耗与破碎率成正比，提高破碎率，导致电能消耗增加； 4、对一定细胞，存在适宜的微球粒径，通常D/d=30-100， D：微球粒径；d：目标细胞粒径。 ;1、操作简便稳定，破碎率可控制，易放大 2、在实验室和工业规模上已得到应用 3、适用于绝大多数微生物细胞破碎，特别对于有大量菌丝体的微生物和一些有亚细胞器（质地坚硬）的微生物细胞。;3、撞击破碎;1、细胞破碎仅发生在与撞击板撞击的一瞬间，细胞破碎均匀，可避免细胞反复受力发生过度破碎的现象。 2、细胞破碎程度可通过无级调节载气压力 (流速)控制，避免细胞内部结构的破坏，适用于细胞器 (如线粒体、叶绿体等)的回收。 3、适用于大多数微生物细胞和植物细胞的破碎，通常处理细胞悬浮液浓度为10%-20%。 4、实验室规模的撞击破碎器间歇处理能力约50-500cm3，而工业规模的连续处理在l0dm3/h以上.;4、超声波破碎法(Ultrasonication);1、处理少量样品时操作方便，液体损伤量少，破碎率高。 2、有效能量利率极低，操作时需在冰水中进行或通入冷却剂而增加成本，不易放大； 3、适用于大多数微生物的破碎，不适于大规模操作，主要用于实验室规模的细胞破碎。;方法; ※ 3.4 CHEMICAL METHODS 化学方法;1.碱处理 ;2. 化学试剂法;2).有机溶剂法 可使细胞膜表面发生变化，胞内产物可以释放出来，由于没有整体破碎细胞，可实现选择性释放.;3).表面活性剂 能够作用细胞质和细胞壁膜，膜结构中的脂蛋白成分被或多或少地溶解，使细胞渗透作用有利于某些蛋白的通过。如：SDS等;;;1、最温和的一种方法 2、选择性高，释放速度快，工艺简单，易放大。 3、适用于易破碎的细胞，和细胞壁预先受到酶处理的细胞，及合成受抑制而强度减弱的细胞，如动物细胞和革兰氏阴性菌。;2) 冷冻－融化法(Freczing an thawirg);5. 胞内产物的选择性释放;3、问题关键：了解目标产物的性质及其所在位置;本章要点;1、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。五月-20五月-20Wednesday, May 27, 2020 2、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。19:28:5419:28:5419:285/27/2020 7:28:54 PM 3、越是没有本领的就越加自命不凡。五月-2019:28:5419:28May-2027-Ma