10.1-实验室种子制备.pdf

实验室种子制备 一、种子概念 种 子 是指将保存在砂土管、冷冻干燥管 中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面 活化后 ，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级 放大培养而获得一定数量和质量的纯种过 程。这些纯种培养物称为种子。 一、种子概念 工业化菌种的要求 l 能够利用廉价的原料 ，简单的培养基 ，大量高效地合成 产物 l 有关合成产物的途径尽可能地简单 ，或者说菌种改造的 l 可操作性要强 l 遗传性能要相对稳定 l 不易感染其它种微生物或噬菌体 l 产生菌及其产物的毒性必须考虑 （在分类学上最好与致 病菌无关 ） l 生产特性要符合工艺要求 实验室种子的制备 实验室种子的制备一般采用两种方式 对于产孢子能力强的及孢子发芽、生长 繁殖快的菌种可以采用固体培养基或斜面 （静 置培养 ）培养孢子 ，孢子可直接作为种子罐的 种子 ，这样操作简便 ，不易污染杂菌。 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢 的菌 种 ，可以用液体培养法 (通过摇瓶培养提供比 较好的溶氧 ）。 孢子的制备 斜面培养基 / 菌体培养一般1—2天 细菌孢子 37℃ 碳源限量而氮源丰富的配方 产芽孢的细菌需5—10天 天然农产品为培养基 / (大米、小 霉菌孢子 25—28℃ 4—14天 米、玉米、麸皮、麦粒等) 琼脂斜面培养基 / (麸皮、豌豆浸 放线菌孢子 28℃ 5—14天 汁、蛋白胨和一些无机盐等) 液体种子制备 （1 ）好氧培养 对于对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种 ， 如产链霉素的灰色链霉菌 （S. griseus ）、产卡那霉 素的卡那链霉菌 （S. Kanamuceticus ）可以用摇瓶 液体培养法。 将孢子接入含液体培养基的摇瓶中 ，于摇瓶机上 恒温振荡培养 ，获得菌丝体 （短菌丝 ），作为种子。 液体种子制备 （2 ）厌氧培养 对于酵母菌 （啤酒 ，葡萄酒 ，清酒等 ） 为什么要进行种子扩大培养 种子扩培的目的 金融保险 l 根据接种量的需要 ，对菌种扩大培养驯 化 ，缩短发酵时间、保证生产水平。 发 酵 罐 多级种子罐 二、种子扩大培养的任务 l 菌种扩大培养的任务就是要为每只发酵罐的投 料提供相当数量的代谢旺盛的种子。 发酵时间的长短与接种量的大小有直接关系 ， 因此在种子扩大培养中必须获得纯而壮的种子 ，而 且还要获得活力旺盛的接种量足够的培养物。 具体接种量的大小要根据具体的发酵过程采用 的菌种确定。 三、作为种子的准则 l 菌种细胞的生长活力强 ，移种至发酵罐后能 迅速生长 ，迟缓期短 l 生理性状稳定 l 菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求 l 无杂菌污染 l 保持稳定的生产能力 休息一下